Giáo trinh : PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHỆM VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM part 4

Ngoài ra khí H2S củng có thể được phát hiện bởi các kim loại khác như chì, bismuth, … để hình thành nên các hợp chất sulphur kim loại có màu đen. 9. Thử nghiệm khả năng sinh indol Nguyên tắc: Phát hiện khả năng của vi khuẩn có thể tạo indol trong môi trường canh trypton Cơ sở sinmh hoá:Tryptophan là một aminoacid có thể bị oxy hoá bởi một số vi sinh vật nhất định tạo nên các hợp chất indol hay các dẫn xuất của chúng như: indol, skatol (methyl indol) và indolacetic...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giáo trinh : PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHỆM VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM part 4http://www.ebook.edu.vnduïng nhieàu hôn citrae saét bôûi vi chuùng tan nhieàu hôn trong moâi tröôøng. FeSO4 cuõng coù theå ñöôïcthay theå cho nguoàn saét trong moâi tröôøng. Ngoaøi ra khí H2S cuûng coù theå ñöôïc phaùt hieän bôûi caùckim loaïi khaùc nhö chì, bismuth, … ñeå hình thaønh neân caùc hôïp chaát sulphur kim loaïi coù maøu ñen. 9. Thöû nghieäm khaû naêng sinh indol Nguyeân taéc: Phaùt hieän khaû naêng cuûa vi khuaån coù theå taïo indol trong moâi tröôøng canhtrypton Cô sôû sinmh hoaù:Tryptophan laø moät aminoacid coù theå bò oxy hoaù bôûi moät soá vi sinh vaätnhaát ñònh taïo neân caùc hôïp chaát indol hay caùc daãn xuaát cuûa chuùng nhö: indol, skatol (methylindol) vaø indolacetic. Moät soá enzym noäi baøo ñöôïc goïi chung laø trytophanase tham gia trong quaùtrình taïo thaønh saûn phaåm indol trong hoaït ñoäng thuyû giaûi tryptophane. Caùc hôïp chaát trung gian trong quaù trình thuyû giaûi tryptophan laø acid indolepyruvic, töø ñoùindol ñöôïc hình thaønh trong quaù trình khöû amin, hình thaønh skatol laø quaù trình khöû carboxyl cuûaacid indol acetic. Quaù trình thuyû giaûi tryptophan coù theå ñöôïc moâ taû qua quaù trình nhö sau: NH3 CH3 – C – COOH H N L-Tryptophane H ⎢⎢ CH3 – C – COOH N N Indolepyruvic Indole H H CH2CHO N H Indoleacetaldehyde CH2COOH N H Indoleacetic acid CH3 N H Skatole Enzym tryptophanase xuùc taùc phaûn öùng khöû amin bôûi söï taán coâng vaøo phaân töû tryptophanôû vò trí maïch nhaùnh vaø taùch nhaân thôm ra khoûi phaân töû tryptophan hình thaønh indol. CH3 – CH - COOH NH2 + CH3 – C – COOH + NH3 N N Tryptophanase H H 30http://www.ebook.edu.vn Söï taùch amin töø tryptophane laø moät daïng phaûn öùng khöû. Qua quaù trình naøy nhoùm aminñöôïc taùch ra vaø chuyeån thaønh NH3, quaù trình khöû giaûi phoùng moät phaán naêng löôïng ñöôïc söû duïngcho hoaït ñoäng taêng tröôûng cuûa vi sinh vaät. Ñoàng thôøi quaù trình naøy coøn taïo thaønh acid pyruvic,cô chaát tham gia vaøo chu trình Krebs’ ñeå tieáp tuïc thu naêng löôïng. Phaùt hieän indol vaø caùc daãn xuaát cuûa chuùng trong moâi tröôøng nuoâi caáy baèng thuoác thöûKovac’s hay Ehrlich’s. Cô chaát chính tham gia phaùt hieän indol trong moâi tröôøng nuoâi caáy laø p-dimethylaminobenzaldehyde (DMAB). Chaáy naøy phaûn öùng vôùi indol taïo thaønh moät phöùc hôïpmaøu ñoû. Phaûn öùng naøy laø do nhaân pyrrol cuûa indol phaûn öùng vôùi nhoùm aldehyde cuûa DMAB quahai giai ñoaïn ñeå taïo thaønh nhaân quinone coù maøu ñoû, phaûn öùng nhö sau: Phöông phaùp thöû: Vi sinh vaät thöû nghieäm ñöôïc nuoâi trong moâi tröôøng canh trypton khoaûn24 - 48 giôø. Nhoû vaøi gioït ether vaøo canh khuaån nhaèm keùo indol leân beà maët moät tröôøng, theâm vaøigioït thuoác thöû Kovac’s hay Erhlich. Quan saùt sau vaøi phuùt, phaûn öùng döông tính neáu treân beà maëtmoâi tröôøng coù voøng maøu ñoù xuaát hieän. Ngöôïc laïi neáu khoâng coù söï xuaát hieän cuûa maøu ñoû hoàngñöôïc coi laø phaûn öùng aâm tính. Thuoác thöû - Thuoác thöû Erhlich: Hoaø tan 4g p-dimethylaminobenzaldehyde trong hoån hôïp goàm 80ml acid HCL ñaâäm ñaëc vaø 380 ethanol tuyeät ñoái. Dung dòch sau khi pha coù maøu vaøng naâu. - Thuoác thöû Kovac’s hoaø tan 5g p-dimethylaminobenzaldehyde trong hoån hôïp goàm 75 ml amyl alcohol vaø 25 ml H2SO4 ñaäm ñaëc.10. Thöû nghieäm treân moâi tröôøng Kligler Iron Agar hay treân moâi tröôøng Triple ...