HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α

Ngày nay với sự phát triển như vũ bão của khoa học công nghệ, đặc biệt trong đó công nghệ sinh học là lĩnh vực đã đạt được những thành quả quan trọng và hứa hẹn đem lại những lợi ích vô cùng to lớn trong tương lai cho con người. Các nghiên cứu hiện nay đang tập trung vào việc chuyển gen để tăng năng suất cây trồng, tạo ra những giống mới có tính năng vượt trội.Tuy nhiên, việc nghiên cứu và phân tích ở mức phân tử DNA thường gặp khó khăn lớn về số lượng và...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  BÙI THỊ THANH TỊNHHOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh 2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS. LÊ ĐÌNH ĐÔN BÙI THỊ THANH TỊNH NIÊN KHÓA: 2002-2006 Thành phố Hồ Chí Minh 2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY,HCHC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY  COMPLETING PROTOCOL OFTRANSFORMATION DNA FRAGMENTS INTO E.coli DH5α BACTERIAL CELLS GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor Student Dr. LE ĐINH ĐON BUI THI THANH TINH TERM: 2002 - 2006 HCMC, 09/2006 LỜI CẢM ƠN Con xin thành kính ghi ơn cha mẹ. Cha mẹ, anh chị và người thân luôn là chỗdựa vững chắc về tinh thần và vật chất cho con. Em vô cùng biết ơn thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hướng dẫn và truyền đạt choem những kinh nghiệm quý báu trong suốt thời gian làm đề tài. Em xin gửi lời cảm ơn đến: Ban giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, ban chủ nhiệm Bộmôn Công Nghệ Sinh Học đã tạo điều kiện thuận lợi cho em trong thời gian học tậpvừa qua. Ban giám đốc Trung tâm Phân Tích Hóa Sinh - Trường Đại học Nông Lâm TP.Hồ Chí Minh cùng toàn thể các anh chị tại Trung Tâm đã tạo điều kiện thuận lợi tối đacũng như tận tình giúp đỡ em trong thời gian thực tập tốt nghiệp. Anh Nguyễn Văn Lẫm đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trìnhlàm đề tài Các anh, chị và các bạn sinh viên thực tập tại phòng 105, 118 - khu Phượng VỹTrường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh đã giúp đỡ tôi. Và cuối cùng là các bạn lớp Công Nghệ Sinh Học K28 đã luôn đồng hành, chiasẻ vui buồn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và làm đề tài. TP. Hồ Chí Minh, tháng 8 năm 2006 Bùi Thị Thanh Tịnh i TÓM TẮT BÙI THỊ THANH TỊNH, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, “Hoàn thiệnquy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α”, được thưc hiệntại Trung tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh và Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật-TrườngĐại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Giáo viên hướng dẫn: thầy Lê Đình Đôn. Đề tài được thực hiện từ tháng 02 năm 2006 đến tháng 08 năm 2006 với các nộidung: Hoàn thiện phương pháp chuẩn bị tế bào khả nạp theo phương pháp sử dụnghoá chất. Hoàn thiện quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α.. Hoàn thiện quy trình chiết tách plasmid, phản ứng cắt plasmid để kiểm tra. Thiết lập phản ứng phủ đầu bằng cho đoạn DNA từ phản ứng PCR và plasmid sau khicắt. Thiết lập phản ứng chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript. Kết quả thu được như sau: Thiết lập được quy trình chuẩn bị tế bào khả nạp sử dụng hoá chất, tế bào khảnạp có thể giữ ở -70oC với glycerol trong thời gian 2 tháng. Biến nạp plasmid vào vi khuẩn E. coli DH5α. Chiết tách plasmid không lẫn tạp theo quy trình của Sambrook và cộng sự cósửa đổi. ii MỤC LỤC TrangLời cảm ơn ................................................................................................................... iTóm tắt ........................................................................................................................iiMục lục ......................................................................................................................iiiDanh sách các chữ viết tắt ........................................................................................viiDanh sách các hình ...................................................................................................viiDanh sách các bảng ................................................................................................... ixPHẦN 1. MỞ ĐẦU .................................................................................................... 11.1 Đặt vấn đề ............................................................................................................. 11.2 Mục tiêu của đề tài................................................................................................ 21.3 Nội dung thực hiện ............................................................................................... 2PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ........................................................................... 32.1 Hiện tương biến nạp ở vi khuẩn ........................................................................... 3 2.1.1 Giới thiệu về hiện tượng biến nạp ................................................................ 3 2.1.2 Cơ sở sinh hóa và tế bào học của hiện tượng biến nạp ................................ 3 2.1.3 Cơ chế của hiện tượn ...