Hoàn thiện quy trình phát hiện đột biến mất đoạn nhỏ AZF trên nhiễm sắc thể giới tính bằng kỹ thuật multiplex PCR

Bài viết trình bày việc xây dựng quy trình phát hiện đồng thời 8 trình tự STS, bao gồm 6 trình tự AZF mở rộng sY88, sY1182, sY105,sY121, sY1191, sY1291 và 2 trình tự chứng SRY và ZFX/Y bằng 1 phản ứng multiplex PCR.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Hoàn thiện quy trình phát hiện đột biến mất đoạn nhỏ AZF trên nhiễm sắc thể giới tính bằng kỹ thuật multiplex PCR vietnam medical journal n02 - SEPTEMBER - 2020 in automated counting performance assessment, requirements for proficiency testing, pp. 12 - 34. Biochemia medica, 27 (1), pp. 63-72. 5. International Standard Organization, (2015),2. Deom A, El Aouad R, Heuck Claus C, Kumari ISO 13528:2015 Statistical methods for use in Sudarshan, et al, (1999), Requirements and proficiency testing by interlaboratory comparison, guidance for external quality assessment schemes pp. 46 - 57. for health laboratories, World Health Organization, 6. Skitek Milan (2003), Practical assessment of the pp. 56-57. suitability of IQC control materials in haemocytometry3. Fink Nilda E, Fernández Alberti Alejandra, based on biologic goals, Accreditation and Quality Crispini Isabel, Cabutti Norberto V, et al, Assurance, 8 (11), pp. 514-519. (1998), Evaluation and additional recommendations 7. WHO, (2016), WHO manual for organizing a for preparing a whole blood control material, Revista national external quality assessment programme de Saúde Pública, 32 pp. 107-111. for health laboratories and other testing sites,4. International Standard Organization, (2010), World Health Organization, pp. 33 - 35. ISO17043:2010. Conformity Assessment – General HOÀN THIỆN QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN NHỎ AZF TRÊN NHIỄM SẮC THỂ GIỚI TÍNH BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR Nguyễn Ngọc Dũng1, Lương Thị Lan Anh1,2, Nguyễn Hoài Bắc1,2, Hoàng Thu Lan1,2, Nguyễn Minh Ngọc2TÓM TẮT 43 MICRODELETION IN SEX CHROMOSOME Mục tiêu nghiên cứu: xây dựng quy trình phát BY USING MULTIPLEX PCRhiện đồng thời 8 trình tự STS, bao gồm 6 trình tự AZF Objectives: aims to detect 8 STSs simultaneouslymở rộng sY88, sY1182, sY105,sY121, sY1191, sY1291 in a multiplex PCR reaction: sY88, sY1182, sY105,và 2 trình tự chứng SRY và ZFX/Y bằng 1 phản ứng sY121, sY1191, sY1291, control STS SRY and ZFX/Y.multiplex PCR. Phương pháp nghiên cứu: Thiết kế Methods: 8 primers have been designed to amplify 8mới các trình tự mồi để khuếch đại 8 STS, thử nghiệm STSs, tested on DNA male and female, 33 DNAtrên 33 mẫu DNA của nam giới vô sinh, DNA mẫu infertility males with azoospermia and severengười nam bình thường và mẫu người nữ bình oligospermia. Results: We designed successfully a setthường. Kết quả nghiên cứu: đã thiết kế thành công of specific and stable primers and successfullycác cặp mồi có tính đặc hiệu và ổn định, khuếch đại amplifying 8 STSs to ensure the correct sequencesthành công các 8 trình tự STSđảm bảo các STS có recommended by EAA/EMQN and in accordance withtrình tự đúng khuyến cáo của EAA/EMQN và phù hợp the NCBI gene bank. 8 plasmids have been created tovới ngân hàng gen NCBI. Đã tạo dòng thành công 8 use as a control for detecting AZF microdeletions.plasmid mang các trình tự DNA marker của các vùng Gather 8 pairs of primers in 1 multiplex PCR reactionAZF, SRY và ZFX/Y, dùng làm mẫu DNA đối chứng cho to amplify 8 STSs simultaneously, PCR productionsviệc phát hiện các mất đoạn nhỏ (vi mất đoạn) trên have been clearly separated on the agarosenhiễm sắc thể giới tính Y. Đồng thời ghép được 8 cặp electrophoresis. Conclusions: We have successfullymồi trong 1 phản ứng multiplex PCR để khuếch đại established the detection 8 STSs including 6 STSs inđược đồng thời 8 trình tự, sản phẩm PCR có kích AZF: sY88, sY121, sY1182, sY105, sY1191,sY1291,andthước khác biệt rõ và phân tách rõ ràng trên bản điện 2 control SRY, ZFX/Y simultaneously in a multiplexdi agarose. Kết luận: Nghiên cứu đã xây dựng thành PCR reaction.công quy trình phát hiện đồng thời 8 trình tự STS, bao Keywords: AZF, azoospermia, oligospermia,gồm 6 trình tự mở rộng thuộc vùng AZF: sY88, sY121, multiplex PCR, microdeletion.sY1182, sY105, sY1191 và sY1291 và 2 đối chứngSRY, ZFX/Y trong 1 phản ứng multiplex PCR. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Từ khóa: AZF, vô tinh, thiểu tinh, PCR đa mồi, đột Trên nhánh dài nhiễm sắc thể giới tính Ybiến vi mất đoạn. (Yq11) của người nam có 1 vùng AZFSUMMARY (azoospermia factor) được gọi là yếu tố gây không có tinh trùng. Vùng AZF được phân loại COMPLETE THE DETECTION AZF thành 3 vị trí chính là AZFa, AZFb và AZFc có chứa các gen quy định việc sản xuất và biệt hóa1Trường Đại học Y Hà Nội tinh trùng. Ước tính có khoảng 10% đến 15%2Bệnh viện Đại học Y Hà Nội các trường hợp nam giới vô sinh liên quan đếnChịu trách nhiệm chính: Lương Thị Lan Anh mất đoạn các vùng AZF [1]. Có 5 vị trí mất đoạnEmail: luongthilananh@hmu.edu.vn có thể xảy ra tại vùng AZF là: AZFa, AZFb, AZFc,Ngày nhận bài: 24.7.2020 AZFb+c hoặc AZFa+b+c. Đặc điểm lâm sàngNgày phản biện khoa học: 27.8.2020 ...