Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR trong bệnh tăng sinh tủy mạn tính

Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR. Ứng dụng quy trình xét nghiệm gen JAK2, CALR xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR trong bệnh tăng sinh tủy mạn tínhY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019 Nghiên cứu Y học HOÀN THIỆN QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM ĐỘT BIẾN GEN JAK2 & CALR TRONG BỆNH TĂNG SINH TỦY MẠN TÍNH Trần Tuấn Anh*, Trần Mai Hồng*, Nguyễn Lê Anh*, Nguyễn Thùy Trang*, Nguyễn Vũ Bảo Anh*, Nguyễn Hà Thanh*, Bạch Quốc Khánh*, Dương Quốc Chính*TÓM TẮT Mục tiêu: Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR. Ứng dụng quy trình xét nghiệmgen JAK2, CALR xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính. Đối tượng: Tổng số 51 mẫu của bệnh nhân thuộc nhóm tăng sinh tủy mạn tính, âm tính với nhiễm sắc thểPh 1, được chẩn đoán và theo dõi điều trị tại Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương. Phương pháp: Nghiên cứu tiến cứu kết hợp hồi cứu, mô tả cắt ngang Kết quả: Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR gồm: giải trình tự gen JAK2, CALRbằng phương pháp NGS; xác định đột biến JAK2V617F bằng phương pháp mồi suy biến; đơn giản hóa quy trìnhxét nghiệm đột biến CALR type 1 và type 2 bằng phương pháp PCR mồi đặc hiệu. Ứng dụng quy trình hoànthiện trên 51 bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính với kết quả phân tích đột biến: JAK2V617F chiếm 83,3% ở bệnhnhân đa hồng cầu nguyên phát và 66,7% ở bệnh nhân xơ tủy nguyên phát. Với bệnh tăng tiểu cầu tiên phát, độtbiến CALR type 1 chiếm 11,4% và CALR type 2 chiếm 5,7% và JAK2V617F chiếm 71,4%. Kết luận: Nghiên cứu đã hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2V617F bằng phương pháp mồisuy biến; xây dựng quy trình PCR để phát hiện đột biến CALR type 1, type 2; và quy trình NGS phát hiện độtbiến ít gặp. Bộ quy trình hoàn thiện đã được ứng dụng trong phân tích đột biến cho 51 bệnh nhân MPNs. Từ khóa: MPNs, CALR, JAK2ABSTRACT OPTIMIZATION OF DETECTION PROTOCOLS FOR JAK2 AND CALR MUTATION IN MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASM Tran Tuan Anh, Tran Mai Hong, Nguyen Le Anh, Nguyen Thuy Trang, Nguyen Vu Bao Anh, Nguyen Ha Thanh, Bach Quoc Khanh, Duong Quoc Chinh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 6 - 2019: 409 - 415 Objectives: Optimizaion of detection protocols for JAK2 and CALR mutation. Then applying theseprotocols for Myeloproliferative neoplasm patients. Subjects: 51 Ph 1 negative MPNs patients have been diagnosed and treated in National Institute ofHematology and Blood Transfusion. Methods: Prospective, retrospective, and cross-sectional study. Results: The protocols for detecting JAK2 and CALR mutation included: JAK2 and CALR gene sequencingby NGS; detect JAK2V617F by degraded primer PCR; simplify protocol for detecting CALR type 1 and type 2 byspecific primer PCR. When these protocols were applied for 51 MPNs patients, the results obtained: JAK2V617F83.3% and 66.7% in polycythaemia vera and primary myelofibrosis respectively; CALR type 1 11.4%, CALRtype 2 5.7% and JAK2V617F 71.4% in essential thrombocythemia. Conclusion: The optimizesd detection protocols for JAK2 and CALR mutation are effective and easy to*Bệnh viện Nhi Đồng 1 **Đại Học Y Dược TP. Hồ Chí Minh* Viện Huyết học -Truyền máu TWTác giả liên lạc: TS. Dương Quốc Chính ĐT: 0962168505 Email: chinh.duong@nihbt.org.vnHội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học 409Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019apply in any molecular diagnostic laboratory and the analysis results of 51 MPNs patients confirmed theeffectiveness of the methods. Key words: MPNs, CALR, JAK2ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Tăng sinh tủy mạn tính (Myeloproliferative Đối tượngneoplasm – MPNs) là nhóm bệnh lý đơn dòng Tổng số 51 mẫu của bệnh nhân thuộc nhómcủa tế bào gốc tạo máu. Bệnh gây nên do sự tăng tăng sinh tủy mạn tính, âm tính với nhiễm sắcsinh không kiểm soát của các tế bào gốc sinh thể Ph 1, được chẩn đoán và theo dõi điều trị tạimáu trong tủy xương, tiến triển mạn tính do liên Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương.quan đến khả năng biệt hóa đến giai đoạn Phương pháptrưởng thành của tế bào dẫn tới tăng sinh các tế Thiết kế nghiên cứubào trưởng thành ở máu ngoại vi(5). Mô tả cắt ngang, tiến cứu kết hợp hồi cứu. Bệnh được đặc trưng bởi sự xuất hiện củacác đột biến trên gen JAK2, CALR hoặc MPL. Đột Kỹ thuật PCR phát hiện đột biến JAK2V617F,biến trên những gen này là đặc trưng quan trọng CALR type 1, type 2được sử dụng cho chẩn đoán, tiên lượng và lựa Kỹ thuật PCR mồi đặc hiệu sử dụng mồi bổchọn phương thức điều trị bệnh. sung hoàn toàn với alen mang đột biến và chỉ sai Kể từ những công bố đầu tiên về đột biến khác với alen bình thường tại một vị trí đột biến.trên gen JAK2 (2005)(2) và đột biến gen CALR Với một sai khác duy nhất mồi vẫn có thể bắt(2013)(9), các phòng nghiên cứu và xét nghiệm cặp vào sợi alen bình thường để tạo nên cácsinh học phân tử đã xây dựng nhiều phương đoạn sản phẩm không đặc hiệu.pháp khác nhau để phát hiện đột biến gồm: PCR Kỹ thuật PCR mồi suy biến sử dụng mồi suyđặc hiệu alen, PCR phân tích đoạn, giải trình tự biến có sửa đổi 1 nucleotide trong phạm vi 5Sanger, giải trình tự NGS (Next-Generation nucleotide đầu 3’ của mồi. Như vậy mồi suySequencing)(2,9,10,14). biến sẽ khác alen bình thường tại 2 vị trí: (1) vị trí Khi vận dụng những phương pháp trên đột biến và (2) vị trí ...