Kết quả bước đầu trong nghiên cứu chuyển gen kháng nguyên Hemagglutinin của virus H5N1 vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza bằng súng bắn gen

Bài viết Kết quả bước đầu trong nghiên cứu chuyển gen kháng nguyên Hemagglutinin của virus H5N1 vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza bằng súng bắn gen trình bày kết quả thu nhận các dòng bèo tấm Spirodela polyrrhiza chuyển gen; Phân tích PCR các dòng bèo S. polyrrhiza chuyển gen; Phân tích Southern blot các dòng bèo S. polyrrhiza chuyển gen.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Kết quả bước đầu trong nghiên cứu chuyển gen kháng nguyên Hemagglutinin của virus H5N1 vào bèo tấm Spirodela polyrrhiza bằng súng bắn gen T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam KẾT QUẢ BƯỚC ĐẦU TRONG NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN KHÁNG NGUYÊN Hemagglutinin CỦA VIRUS H5N1 VÀO BÈO TẤM Spirodela polyrrhiza BẰNG SÚNG BẮN GEN Phạm Thị Lý Thu, Nguyễn Văn Đồng, Lê Huy Hàm SUMMARY Primary results of studies on hemagglutinin antigen transformation of H5N1virus in duckweed Spirodela polyrrhiza by particle bombardment The development of modern biotechnology has created significant step in the production of vaccines against viral diseases. The study of vaccine production system using transgenic plants is one of the essential research approaches meeting the social demands and has obtained remarkable achievements. Three transgenic lines of S. polyrrhiza duckweed were obtained carrying the Hemagglutinin antigen (HA1) of H5N1 virus by applying of particle bombardment transformation method in 20 experiments. The presence of HA1 gene in transgenic duckweed lines were analyzed by PCR and Southern blot. This results will be the scientific basis and starting materials for edible vaccine production in plant systems. Keywords: Hemagglutinin antigen, Spirodela polyrrhiza, particle bombardment, transformation, H5N1 virus uyền cũng như phương pháp chuyển nạp I. §ÆT VÊN §Ò Sự phát triển của công nghệ sinh học Với lợi thế sinh sản nhanh, hàm lượng hiện đại đã tạo ra những bước tiến quan protein lớn (6,8 45%), phân bố rộng rãi trên trọng trong sản xuất vaccine chống lại các ắp thế giới của bèo tấm (Landolt, 1986), bệnh do virus. Đối với bệnh truyền nhiễm, kết hợp với những ưu điểm của phương vaccine được coi là biện pháp chiến pháp chuyển gen vào thực vật bằng sún lược, nhằm ngăn chặn lây lan, tạo bảo hộ bắn gen th cá ứu chuyển gen miễn dịch. Đối với dịch cúm A/H5N1 ở á ủ ấ gia cầm, nghiên cứu phát triển à ấ ầ ế những ngăn ngừa được bệnh ở gia cầm, mà còn khống chế nguồn truyền lây báo kết quả bước đầ ứu chuyển của loại virus nguy hiểm này sang người á ủ Lê Thanh Hòa và cộng sự 2008) bèo tấm ằng phương cứu sản xuất vaccine bằ ệ ố áp bắn gen. ể ự ậ à một trong những hướng nghiên cứu mang tí ờ ự đá II. VËT LIÖU Vµ PH¦¥NG PH¸P NGHI£N CøU ứng được đò ỏ ủ ự ế 1. Vật liệu nghiên cứu a. Vật liệu thực vật năm trở lại đây, việc nghiên cứu, phát triển và thử nghiệm hệ ố ự ậ Mẫu bèo tấm đã thu được những thà ựu đá ể được thu thập trên đồng ruộng tại địa bàn Hà Nội và được nuôi trong vại sành ở nhà nhiên, hiệu quả chuyển gen phụ thuộc rất lướ ủa Viện Di truyền Nông nghiệp. Đây lớn vào bản chất cây trồng, đặc tính di T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam là một trong những loài phân bố rộng rãi tại 5 chu kỳ chọn lọc (mỗi chu kỳ 5 Việt Nam và khu vực Châu Á. ngày), các dòng bèo sống sót được nhân b. Vật liệu di truyền trên môi trường H/2 nhằ ạ ồ ố èo đủ á ọ Chúng tôi sử dụng DNA plasmid mang ử các cấu trúc vector biểu hiện như sau: (i) UbiHA1 có cấu trúc Phương pháp phân tích cây chuyển gen Phương pháp tách chiết DNA tổng số cấu trúc promoter CAMV35S + HA1 + của bèo tấm His_tag + NOS terminater do Viện Công nghệ sinh học và Viện Di truyền nông ôi sử dụng phương pháp tách nghiệp thiết kế. Các vector này được nhân chiết DNA tổng số của Đại học Tổng hợp dòng trong vi khuẩn chủng DH5α. Bonn (CHLB Đức). Bèo được nghiền bằng cối (giữ lạnh ở C) cùng với 2. Phương pháp nghiên cứu 3 ml đệm chiết. Sau đó mẫu được chuyển vào ống eppendorf và thêm vào 300 µl đệm Phương phá á ế SDS 20%, ủ ở 65 của vi khuẩ ml Acetate Kalium và ủ trong 2 phút trên đá DNA plasmid mang cấu trúc gen ...