Khảo sát điều kiện biểu hiện và tinh chế Interleukin-33 người dung hợp với SUMO trên Escherichia coli

Interleukin (IL)-33 là một thành viên mới trong họ IL-1, đóng vai trò quan trọng trong các phản ứng miễn dịch ở người thông qua tương tác với thụ thể ST2. Bài viết trình bày khảo sát các điều kiện nuôi cấy để thu lượng protein dạng tan và tinh chế IL33 người tái tổ hợp bằng sắc ký ái lực cố định ion kim loại (IMAC).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát điều kiện biểu hiện và tinh chế Interleukin-33 người dung hợp với SUMO trên Escherichia coli vietnam medical journal n03 - MAY - 2024 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN BIỂU HIỆN VÀ TINH CHẾ INTERLEUKIN-33 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI SUMO TRÊN ESCHERICHIA COLI Nguyễn Quốc Thái1, Nguyễn Kim Hưng1, Tôn Thảo Vy1, Vũ Thanh Thảo1TÓM TẮT obtained approximately 20 mg of purified protein by Ni Sepharose column. Conclusion: In this study, we 52 Đặt vấn đề: Interleukin (IL)-33 là một thành viên have examined the culture and the purificationmới trong họ IL-1, đóng vai trò quan trọng trong các conditions suitable to obtain soluble SUMO-IL-33 withphản ứng miễn dịch ở người thông qua tương tác với high yield. Keywords: recombinant humanthụ thể ST2. Do đó, IL-33 là một đích tác động tiềm interleukin-33, IMAC, pET-SUMO, E. colinăng để phát triển các thuốc điều trị các bệnh lý liênquan IL-33. Nhóm nghiên cứu đã thành công tạo dòng I. ĐẶT VẤN ĐỀEscherichia coli mang plasmid biểu hiện IL-33 ngườitái tổ hợp dạng dung hợp với tag SUMO. Mục đích: IL-33 là một thành viên mới trong họ IL-1,khảo sát các điều kiện nuôi cấy và tinh chế IL-33 đóng vai trò quan trọng trong các quá trìnhngười tái tổ hợp. Phương pháp: Khảo sát các điều viêm, nhiễm khuẩn và phản ứng tự miễn thôngkiện nuôi cấy để thu protein dạng tan: môi trường (LB, qua tương tác với thụ thể ST2. Những nghiênTB, ZYP-5052); nhiệt độ (25°C và 37℃). Tinh chế IL- cứu trên động vật thử nghiệm và mô bệnh cho33 dạng dung hợp bằng sắc ký ái lực cố định ion kim thấy IL-33 là một đích tác động đầy hứa hẹn đểloại (IMAC) Kết quả: Chủng E. coli BL21(DE3) tái tổhợp có khả năng tạo SUMO-IL-33 dạng tan với hiệu điều trị các rối loạn miễn dịch liên quan đến sựsuất cao trong môi trường tự cảm ứng ZYP-5052 ở điều hòa tín hiệu của cytokin như hen suyễn, dị25℃. Từ 50mL dịch nuôi cấy tinh chế qua cột Ni ứng, viêm khớp dạng thấp, xơ vữa động mạch [1].Sepharose thu được khoảng 20 mg protein. Kết luận: Việc nghiên cứu sản xuất và phát triển thuốcNghiên cứu đã khảo sát được các điều kiện nuôi cấy mới dựa trên ức chế tương tác giữa Il-33 và thụvà tinh chế thích hợp để thu IL-33 tan ở dạng dung thể ST2 đòi hỏi sự chủ động trong nguồn cunghợp với tag SUMO với hiệu suất cao. Từ khoá: interleukin-33 người tái tổ hợp, IMAC, IL-33. Hiện nay vẫn chưa có nhà cung cấp IL-33pET-SUMO, E. coli trong nước trong khi nguồn nhập khẩu có giá thành khá cao. Bước đầu tiên nhóm nghiên cứuSUMMARY đã tạo thành công chủng Escherichia coli mang EXPRESSION AND PURIFICATION OF gen mã hoá cho il33 người được tối ưu hoá cho HUMAN INTERLEUKIN-33 FUSED WITH biểu hiện trên E. coli. Trong nghiên cứu này SUMO IN ESCHERICHIA COLI chúng tôi tiến hành khảo sát các điều kiện nuôi Background: Interleukin (IL)-33 is a newmember of the IL-1 superfamily that plays crucial roles cấy để thu lượng protein dạng tan và tinh chế IL-in human immune responses via interaction with its 33 người tái tổ hợp bằng sắc ký ái lực cố địnhST2 receptor. IL-33 thus appears an attractive target ion kim loại (IMAC).for the drug development against IL-33 relateddisorders. Our research group has successfully II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUtransformed Escherichia coli with plasmid bearing 2.1. Khảo sát biểu hiện protein tái tổhuman il33 gene fused with SUMO tag. Objectives: hợp. E. coli BL21(DE3) mang vector tái tổ hợpThis study aims to examine the culture conditions and pET-SUMO-il33 được cấy hoạt hóa trong môithe purification process to obtain the recombinant IL-33. Methods: Expression conditions for optimal trường LB (bổ sung kanamycin 50 μg/mL,soluble recombinant IL-33 were examined, including glucose 1%), lắc ở 37 °C qua đêm. Sau đó viculture medium (LB, TB, ZYP-5052); temperature khuẩn tái tổ hợp được cấy chuyền sang các môi(25°C and 37℃). The recombinant IL-33 fused with trường khảo sát (mục 2.2) bổ sung kanamycinSUMO tag ...