Khảo sát đột biến FLT3-ITD bằng kỹ thuật Delta-PCR

Đề tài “Khảo sát đột biến FLT3-ITD bằng kỹ thuật Delta-PCR” trên người bệnh bạch cầu cấp dòng tủy để hoàn thiện quy trình xác định các dòng đột biến gen FLT3-ITD và đánh giá khả năng ứng dụng để chẩn đoán và theo dõi sau điều trị.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát đột biến FLT3-ITD bằng kỹ thuật Delta-PCR TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN FLT3-ITD BẰNG KỸ THUẬT DELTA-PCR Châu Thúy Hà1, Cao Văn Động1, Phù Chí Dũng1, Phan Thị Xinh2TÓM TẮT 29 SUMMARY Mục tiêu: Triển khai kỹ thuật Delta-PCR DETECTING FLT3-ITD MUTATIONStrong khảo sát đột biến FLT3-ITD. BY USING DELTA-PCR TECHNIQUE Đối tượng: Mẫu người bệnh có 2 đột biến Objectives: To perform Delta-PCR techniqueFLT3-ITD đã chẩn đoán bằng kỹ thuật tạo dòng in detecting FLT3-ITD mutations.T-vector phối hợp với kỹ thuật giải trình tự Subjects: Patient samples with 2 types ofSanger. FLT3-ITD mutations were diagnosed by T- Phương pháp nghiên cứu: Mô tả triển khai vector cloning associated with Sangerkỹ thuật mới. sequencing. Kết quả: Chúng tôi đã thành công ứng dụng Method: Prospective case series.Delta-PCR (Polemerase Chain Reaction: phản Results: We have successfully applied Delta-ứng khuếch đại chuỗi) để khảo sát đột biến PCR technique in detecting FLT3-ITDFLT3-ITD (Fms Related Receptor Tyrosine mutations. The size of ITDs identified by DeltaKinase 3-internal tandem duplication: đột biến PCR in all of 4 patients were similar to thelặp đoạn gen FLT3). Kích thước đoạn chèn xác results of cloning and Sanger sequencingđịnh bằng kỹ thuật Delta PCR ở cả 4 người bệnh techniques. This method could identify FLT3-đều hoàn toàn phù hợp với kỹ thuật tạo dòng và ITD mutant clones and determine FLT3 allelgiải trình tự Sanger. Kỹ thuật này có thể định ratio with limit of detection as low as 0.1%.danh các dòng và xác định tỉ lệ các dòng đột biến Conclusion: Delta-PCR could detect FLT3-FLT3-ITD với giới hạn phát hiện thấp đến 0,1%. ITD mutant clones at low level, so it will be Kết luận: Kỹ thuật này ưu thế trong việc xác useful device in monitoring mesurable diseaseđịnh các dòng minor, là công cụ tiềm năng trong postreatment.ứng dụng theo dõi tồn lưu tế bào ác tính mang Keywords: FLT3-ITD, Delta-PCR.đột biến FLT3-ITD. Từ khóa: FLT3-ITD, Delta-PCR . I. ĐẶT VẤN ĐỀ Đánh giá bệnh tồn lưu tối thiểu cho phép đánh giá đáp ứng điều trị, phát hiện sớm các đợt tái phát, từ đó có thể xác định những1 Bệnh viện Truyền Máu Huyết Học người bệnh cần tái điều trị sớm hay thay đổi2 Đại Học Y dược TPHCM phác đồ điều trị. Một trong những đột biếnChịu trách nhiệm chính: Châu Thúy Hà gen xuất hiện với tần suất cao trong bạch cầuSĐT: 0939.162.969 cấp dòng tủy là FLT3-ITD. Do đó, có thểEmail: drthuyha@gmail.com dùng đột biến này như một chỉ điểm để theoNgày nhận bài: 01/8/2022 dõi tồn lưu tế bào ác tính. FLT3-ITD còn tồnNgày phản biện khoa học: 01/8/2022 lưu tại thời điểm dị ghép tế bào gốc dự báoNgày duyệt bài: 15/9/2022 nguy cơ tái phát cao hơn có ý nghĩa thống kê 257 KỶ YẾU CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁUso với nhóm mất FLT3-ITD trước ghép [1]. - Thực hiện phản ứng khuếch đại chuỗiTuy nhiên, đột biến FLT3-ITD thường không bằng Takara Taq (Mỹ) với 1 mồi xuôi và 2ổn định, ở thời điểm tái phát, đột biến này có mồi ngược, các mồi tự thiết kế và điều kiệnthể biến mất hoặc biểu hiện 1 kiểu lặp đoạn bắt cặp mồi sẽ được thử ở 58oC, 60oC vàkhác với ban đầu [2]. Mặt khác, đột biến 62oC.FLT3-ITD có thể biểu hiện nhiều dòng lúc - Điện di mao quản bằng máy 3500, ghichẩn đoán, chính những dòng minor này nhận kích thước và diện tích các đỉnh đặckhông được phát hiện bởi kỹ thuật giải trình hiệu.tự, có thể kháng với điều trị và gây nên tình Các bước tiến hành nghiên cứutrạng tái phát [3]. - Thử điều kiện phối hợp và bắt cặp Sự đa dòng cũng như tính biến thiên mồi trên 1 mẫu người bệnh có 2 đột biếndòng đột biến FLT3-ITD đòi hỏi cần có 1 kỹ FLT3-ITD đã xác định bằng giải trình tựthuật đủ nhạy và đặc hiệu để khảo sát đầy đủ Sanger.các dòng đột biến FLT3-ITD ở thời điểm - So sánh kết quả định danh đoạn chènchẩn đoán, đồng thời, có thể theo dõi động với kỹ thuật tạo dòng phối hợp giải trình tựhọc của các dòng này sau điều trị. Do đó, Sanger trên 4 mẫu người bệnh có 2 đột biếnchúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Khảo FLT3-ITD.sát đột biến FLT3-ITD bằng kỹ thuật Delta- - Xác định giới hạn phát hiện trên cácPCR” trên người bệnh bạch cầu cấp dòng tủy mẫu có tỉ số alen FLT3-ITD/WT ở các mứcđể hoàn thiện quy trình xác định các dòng 5%, 3%, 1%, 0,1%đột biến gen FLT3-ITD và đánh giá khả năng Thu thập và xử lý số liệuứng dụng để chẩn đoán và theo dõi sau điều Dữ liệu giải trình tự sau khi phân tíchtrị. bằng phần mềm GeneMapper được chúng tôi tiến hành tổng hợp và báo cáo số liệu.II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu: III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Mẫu người bệnh bạch cầu cấp ...