Khảo sát mức độ nhạy cảm của candida spp. với fluconazole

Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát mức độ nhạy của candida spp. phân lập từ bệnh nhân nhiễm nấm tại 5 Bệnh viện ở TP. HCM. với fluconazole. Định danh các chủng candida kháng fluconazole bằng PCR.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khảo sát mức độ nhạy cảm của candida spp. với fluconazole Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT MỨC ĐỘ NHẠY CẢM CỦA CANDIDA SPP. VỚI FLUCONAZOLE Nguyễn Thị Thúy Anh*, Trần Cát Đông**, Nguyễn Đinh Nga** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Việc sử dụng thường xuyên fluconazole trong điều trị là nguyên nhân gây ra sự kháng thuốc ở Candida albicans và Candida non albicans. Mục tiêu nghiên cứu: Khảo sát mức độ nhạy của Candida spp. phân lập từ bệnh nhân nhiễm nấm tại 5 Bệnh viện ở TP. HCM. với fluconazole. Định danh các chủng Candida kháng fluconazole bằng PCR. Vật liệu và phương pháp: Mức độ nhạy của 129 chủng Candida với fluconazole được thực hiện bằng phương pháp khuếch tán theo NCCLS M44-A. Định danh các chủng Candida non albicans bằng giải trình tự vùng ITS. Kết quả: 93.64% chủng Candida albicans trong thử nghiệm nhạy với fluconazole. 5/19 chủng Candida non albicans kháng fluconazole có trình tự ITS tương đồng với trình tự ITS loài Candida glabrata và Candida tropcalis. Bàn luận và kết luận: Tỷ lệ Candida non albicans kháng fluconazole cao hơn C. albicans. Vì vậy cần sử dụng môi trường thích hợp để định danh Candida hoặc thực hiện kháng sinh đồ để chọn thuốc kháng nấm thích hợp. Từ khóa: Candida albicans, Candida non albicans, fluconazole, MHA – GMB,PCR ABSTRACT SURVEY ON SUSCEPTIBILITY OF CANDIDA SPP. TO FLUCONAZOLE Nguyen Thi Thuy Anh, Tran Cat Dong, Nguyen Đinh Nga * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 16 - Supplement of No 1 - 2012: 83 - 85 Background: Over the past few decades, Candida spp. are the most common of fungal pathogens and the emergence of drug resistant Candida spp. become an important problem in therapy. Objective: to determine the antifungal susceptibility of Candida isolates to fluconazole. Material and methods: The antifungal activity against 129 trains of Candida spp. of fluconazole were determined by the Disk diffusion method according to the guidline of NCCLS M44-A. The PCR amplification of the internal transcribed spacers (ITS1 and ITS2) is used for species identification. Outcome: 93,64% of Candida albicans were sensible to fluconazole. 5/19 resistant strains are identified belong to Candida glabrata and Candida tropicalis. Conclusion: Disk diffusion test are simple to set up to propose a reasonable antifungal agent for physicians Key words: Candida albicans, Candida non albicans, MIC, MHA-GMB, MHB-GMB. chóng từ đầu thập niên 1990 đến nay, đặc biệt ở ĐẶT VẤN ĐỀ người suy giảm miễn dịch. Một số báo cáo Bệnh do Candida gây ra gia tăng nhanh ngoài nước cảnh báo việc sử dụng fluconazole  Trường Đại học Khoa học tự nhiên  Đại học Y Dược TP. HCM Tác giả liên lạc: TS. Nguyễn Đinh Nga ĐT: 0908 836969 Email: nganguyendinh@yahoo.com Chuyên Đề Ký Sinh Trùng 83 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012 thường xuyên trong điều trị, cộng với tỉ lệ bệnh do Candida non albicans đang có khuynh hướng tăng dần(1,6) có thể là nguyên nhân làm kéo dài thời gian hoặc thất bại trong điều trị bệnh do Candida. Để tìm hiểu mức độ đáp ứng của Candida phân lập từ một số bệnh nhân Việt Nam với fluconazole, trong phạm vi đề tài chúng tôi khảo sát mức độ nhạy của Candida spp. với fluconazole in vitro. ĐỐI TƯỢNG -PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 129 chủng Candida spp. phân lập từ bệnh nhân nhiễm Candida ở 5 bệnh viện tại TP. Hồ Chí Minh từ tháng 5 đến tháng 8 năm 2011. Candida albicans ATCC 10231, được sử dụng làm chủng đối chứng, nhạy với fluconazole với đường kính vòng kháng nấm từ 38-40 mm Chất kháng nấm Fluconazole USP, lô FLU-09 12 085, hàm lượng 99,41%. Môi trường Mueller Hinton Broth (Merck) và CzapeckDox ((Merck). Phương pháp nghiên cứu Để xác định mức độ nhạy của Candida spp. với fluconazolee Chúng tôi sử phương pháp khuếch tán theo hướng dẫn của NCCLS M44-A(2, 4) với các điều kiện thử nghiệm như sau: Đĩa giấy tẩm fluconazole 25 µg, thạch Mueller Hinton bổ sung 2% glucose và xanh methylen 5 µg/ml (MHA-GMB). Đo đường kính vòng ức chế sau 24 giờ ủ ở 370C. Dựa vào đường kính vòng ức chế, mức độ nhạy của Candida spp với fluconazole được NCCLS M44 chia thành 3 mức, nhạy (S) khi đường kính vòng ức chế ≥ 19 mm; nhạy tùy thuộc liều (SDD) khi đường kính vòng ức chế từ 15-18 mm và đề kháng (R) với đường kính vòng ức chế ≤ 14 mm. 84 Định danh Candida spp. Phân nhóm Candida albicans và Candida non albicans: Dựa vào các đặc điểm sợi nấm giả - bào tử bao dầy trên môi trường thạch bột ngô và sự tạo ống mầm trong huyết thanh sau 3-4 giờ ủ ở 37 oC(5) Đinh danh Candida non albicans đến mức loài bằng PCR(3): Sử dụng cặp mồi ITS1 (5’ TCC GTA GGT GAA CGT GCG G 3’) và ITS4 (5' TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3'). Phản ứng PCR được thực hiện trong ống eppendorf 0.2 ml với thể tích hỗn hợp là 50 l có thành phần phản ứng như sau: 1 M mỗi mồi, 0,5 mM dNTP, 2 mM MgSO4 ,1X buffer và 1U Taq Polymerase. Tiền biến tính DNA trong 950C, 10 phút, 1 chu kỳ. Chu kỳ khuếch đại gồm 30 chu kỳ: biến tính 950C, 45 giây, gắn mồi ...