KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1

THU HỒI NUCLEIC ACID1. PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT- Tách chiết DNA- Tách chiết RNA2. PHƯƠNG PHÁP LY TÂM- Ly tâm phân đoạn- Ly tâm đẳng tỷ trọng – Thu nhận nucleic acid tinh sạch3. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝThu mRNA
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN 1 QUAÙ TRÌNH NGHIEÂN CÖÙU GENE Söû duïng caùc enzyme, vectorTaùch chieât PCR, Taïo Giaûi Southern Northern Gaây taïoDNA, RNA RT-PCR doøng trình töï blot blot ñoät bieán COÂ LAÄP THU NHAÄN XAÙC ÑÒNH CAÁU TÌM HIEÅU CHÖÙC GENE GENE TRUÙC GENE NAÊNG CUÛA GENE Phaân tích Toång hôïp Caùc phöông Phieân maõ ... phaùp in silico ñònh tính, nhaân taïo – dòch maõ in vitroñònh löôïngÑieän Ño di OD ÖÙNG DUÏNGMuïc tieâu : Hieåu roõ caáu truùc vaø chöùc naêng cuûa geneñeå öùng duïng vaøo caùc lónh vöïc khoa hoïc vaø ñôøi soáng 2 NOÄI DUNG1. Thu hoài nucleic acid2. Phaân tích ñònh tính vaø ñònh löôïng nucleic acid3. Söû duïng caùc enzyme thoâng duïng trong sinh hoïc phaân töû4. Lai phaân töû5. Taïo doøng6. PCR7. Giaûi trình töï nucleic acid8. Bieán ñoåi vaät lieäu di truyeàn vaø chuyeån vaät lieäu di truyeàn ñaõbieán ñoåi vaøo teá baøo 3 THU HOÀI NUCLEIC ACID1. PHÖÔNG PHAÙP TAÙCH CHIEÁT - Taùch chieát DNA - Taùch chieát RNA2. PHÖÔNG PHAÙP LY TAÂM - Ly taâm phaân ñoaïn - Ly taâm ñaúng tyû troïng – Thu nhaän nucleic acid tinh saïch3. PHÖÔNG PHAÙP SAÉC KYÙ Thu mRNA 4 TAÙCH CHIEÁT DNA & RNA DNA RNA Thiocyanate1. Phaù maøng teá baøo, maøng nhaân Chaát taåy (SDS) guanidinium + sieâu aâm, .. LiCl, Urea, .. + cô hoïc, ..2. Loaïi protein Phenol pH8 : Phenol pH4 : Chloroform:IAA Chloroform:IAA Khaùc Khaùc3. Thu hoài nucleic acid : Tuûa Ethanol tuyeät ñoái Ethanol tuyeät ñoái Isopropanol, .. Isopropanol, .. Boom Haáp phuï treân silica Haáp phuï treân silica Loïc Thu treân maøng loïc Thu treân maøng loïc 5PHAÙ MAØNG SINH HOÏC BAÈNG CHAÁT TAÅY Chaát taåy ion hoùa coù taùc duïng phaù maøng maïnh, khoâng ion hoùa coù taùc duïng phaù maøng nheï hôn. Chaát taåy, laø phaân töû löôõng cöïc, seõ keát hôïp vôùi protein maøng vaø caùc phaân töû phospholipid laøm phaù vôõ caáu truùc maøng 6LY TAÂM PHAÂN ÑOAÏN Ly taâm phaân ñoïan (a) vaø phaân ñoaïn vuøng (b) phaân taùch caùc phaàn töû trong hoãn hôïp döïa treân khoái löôïng cuûa chuùng. Thôøi gian vaø löïc ly taâm ñöôïc xaùc ñònh cho töøng nhoùm phaàn töû. Dung dòch ly taâm coù tyû troïng thaáp hôn caùc phaàn töû caàn phaân taùch 7LY TAÂM ÑAÚNG TYÛ TROÏNG Ly taâm ñaúng tyû troïng (isopycnic) phaân taùch caùc phaàn töû trong hoãn hôïp döïa treân tyû troïng cuûa chuùng. Thôøi gian vaø löïc ly taâm laø chung cho caùc nhoùm phaàn töû. Dung dòch ly taâm coù tyû troïng vôùi giaù trò ñi töø thaáp hôn ñeán cao hôn tyû troïng cuûa caùc phaàn töû caàn phaân taùch 8THU HOÀI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TAÂM ÑAÚNG TYÛ TROÏNG 9 CAÙC PHÖÔNG PHAÙP SAÉC KYÙSaéc kyùloïc gel Saéc kyù aùi löïc KT-KNSaéc kyùtraoñoåi ion 10 ...