KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 5

Tham khảo tài liệu kỹ thuật di truyền - phần 5, tài liệu phổ thông, sinh học phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 5TAÏO DOØNGHAI CHIEÁN LÖÔÏC TAÏO DOØNG IN VIVO & IN VITRONGUYEÂN TAÉC TAÏO DOØNG (IN VIVO) CAÙC BÖÔÙC TAÏO DOØNGChuaån bòvector Bieán naïp Choïn loïc Taïo vector vector taùi toå doøng caàn taùi toå hôïpChuaån bò hôïp vaøo vi tìmtrình töï khuaåntaïo doøng(insert) Lai vôùi Hoùa Xöû lyù Noái maãu doø bieán naïp enzyme vector/ ñaëc hieäu taïo insert DNA : Ñieän ñaàu so PCRtaùch chieát bieán naïp le, ñaàu vôùi moàiDNA boä Bieán baèng ñaëc hieäugene, PCR, naïp baèngtoång hôïp Söû sieâu aâm, … duïng RNA : khaùngtaùch chieát theå ñaëcRNA vaø hieäuRT, RT-PCR CHUAÅN BÒcDNA ÑEÅ TAÏO DOØNG mRNA cDNA gaén theâm caùc linker coù mang trình töï nhaän bieát cuûa RE Caét baèng RE töông öùng taïo ñaàu so leXÖÛ LYÙ ÑOAÏN GAÉN CHEØN COÙ ÑAÀU BAÈNG Gaén theâm caùc linkers mang trình töï nhaän bieát cuûa RE Vector coù chöùa caùc trình töï nhaän bieát cuûa RE töông öùng TAÏO DOØNG BAÈNG PCR Moài (primer) duøng trong phaûnöùng PCR coù mang trình töï nhaän bieátcuûa RE Saûn phaåm PCR ñöôïc caét baèng REphuø hôïp taïo ñaàu so le Noái vôùi vector ñaõ xöû lyù vôùi cuøngloaïi RE TAÏO DOØNG TRONG PLASMID- Taïo plasmid taùi toå hôïp- Bieán naïp teá baøo E. coli : uû chung vôùiplasmid TTH coù hieän dieän CaCl2 ; taïosoác nhieät- Nuoâi treân ñóa thaïch coù ampicillin ñeåchoïn doøng vi khuaån coù thu nhaänplasmid TTH- Thu nhaän caùc doøng teá baøo coù chöùaplamid TTH pBR322 Plasmid theá heä thöù nhaát Plasmid theá heä thöù hai :pBR322 Plasmid theá heä thöù ba :pUC, pSP, Bluescript, ..PLASMID pUC18/19TAÏO DOØNG TRONG PLASMID pUCBOÄ GENE PHAGE VAØ SÖÏ TÖÏ RAÙPTAÏO DOØNG VÔÙI VECTOR LAØ PHAGE Thu nhaän DNA phage Loaïi boû trình töï khoâng caàn cho söï ñoùng goùi Gaén trình töï caàn taïo doøng vaøo thay cho trình töï loaïi boû Ñoùng goùi vaøo voû boïc cuûa phage Ñem xaâm nhieãm teá baøo vi khuaån ñeå chuyeån trình töï caàn taïo doøng vaøo vi khuaån TAÏO DOØNG cDNA TRONG PHAGEÑem dung dòch phage taùi toå hôïp traûi treân lôùpteá baøo vi khuaån phuû ñaày maët thaïch taïo ñóaly giaûi TAÏO ÑÓA LY GIAÛI (PLAQUE ASSAY)Beà maët thaïch phuû moät lôùp teá baøo E. coli Theâm huyeàn phuø virus taùi toåhôïp Phuû tieáp leân treân moät lôùp agar meàm UÛ Moãi ñóa ly giaûi töôngöùng vôùi vuøng ly giaûi do moät phaàn töû virus gaây raPHAÙT HIEÄN ÑÓA LY GIAÛI COÙ CHÖÙA DOØNG CAÀN TÌM Hoäp thaïch vôùi caùc ñóa ly giaûi Aùp maøng lai leân maët thaïch UÛ maøng lai trong dung dòch kieàm ñeå ly giaûi phage giaûi phoùng DNA phage Tieàn lai - Lai vôùi maãu doø Phaùt hieän phaân töû laiTOÅNG HÔÏP M13 MAÏCH ÑOÂICOSMID VECTOR PHC79TAÏO DOØNG BAÈNG VECTOR COSMIDTAÏO NGAÂN HAØNG BOÄ GENE ...