Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Biểu hiện, tinh sạch và đánh giá tính chất của lumbrokinase ở Pichia pastoris

Luận văn tập trung giải quyết các vấn đề sau: Sử dụng công nghệ gen và công nghệ protein để biểu hiện và tinh sạch được enzyme lumbrokinase có hoạt tính thủy phân fibrin; nghiên cứu một số tính chất của enzyme LK tái tổ hợp tinh sạch được.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Biểu hiện, tinh sạch và đánh giá tính chất của lumbrokinase ở Pichia pastoris ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VŨ THỊ BÍCH NGỌCBIỂU HIỆN, TINH SẠCH VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT CỦA LUMBROKINASE Ở PICHIA PASTORIS LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VŨ THỊ BÍCH NGỌC BIỂU HIỆN, TINH SẠCH VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT CỦA LUMBROKINASE Ở PICHIA PASTORIS Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số : 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌCNGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS. TS. QUYỀN ĐÌNH THI PGS. TS. TRỊNH HỒNG THÁI Hà Nội - 2014Luận văn thạc sĩ Khoa Sinh học LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới PGS. TS. Quyền ĐìnhThi- Trưởng phòng Công nghệ sinh học Enzyme- Viện Công nghệ sinh học- Viện Hàn lâmkhoa học và công nghệ Việt Nam, người thầy đã rất quan tâm, tận tình chỉ bảo, địnhhướng nghiên cứu và hướng dẫn tôi trong suốt quá trình công tác, học tập, tạo mọi điềukiện để tôi có thể hoàn thành tốt luận văn này. Tôi cũng xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS. TS. Trịnh Hồng Thái- Trưởngphòng Proteomic và Sinh học cấu trúc- Đại học Khoa học tự nhiên- Đại học quốc gia HàNội, người thầy đã tạo nền tảng cho tôi từ những ngày đầu tiên làm quen với sinh học thựcnghiệm. Thầy đã rất nhiệt tình hướng dẫn, chỉ bảo tôi trong quá trình học tập tại trường,sửa chữa luận văn và động viên tôi trong thời gian nghiên cứu. Để thực hiện tốt luận văn này, tôi cũng xin trân trọng cảm ơn các thầy giáo, côgiáo trong khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học tự nhiên, đặc biệt là các thầy cô giáotrong bộ môn Sinh lý Thực vật và Hóa sinh học đã tận tình giảng dạy và dìu dắt tôi trongsuốt thời gian học tập tại trường. Trong quá trình học tập, làm việc và thực hiện luận văn, tôi đã nhận được sự chỉbảo nhiệt tình, sự giúp đỡ, chia sẻ những kinh nghiệm trong công việc và cuộc sống củaTS. Đỗ Thị Tuyên, TS. Lý Thị Bích Thủy cùng các anh chị và các bạn học viên, sinh viênlàm việc tại Phòng Công nghệ sinh học Enzyme- Viện Công nghệ sinh học- Viện Hàn lâmkhoa học và công nghệ Việt Nam. Tôi xin chân thành cảm ơn. Cuối cùng, tôi vô cùng biết ơn gia đình và bạn bè đã khích lệ, động viên và luônbên tôi trong suốt thời gian qua. Hà Nội, tháng 10 năm 2014 Học viên Vũ Thị Bích NgọcVũ Thị Bích Ngọc i Cao học K20Luận văn thạc sĩ Khoa Sinh học MỤC LỤCLỜI CẢM ƠN .............................................................................................................iMỤC LỤC ................................................................................................................. iiDANH MỤC CÁC BẢNG ........................................................................................ vDANH MỤC CÁC HÌNH ........................................................................................viBẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT .................................................... viiiMỞ ĐẦU .................................................................................................................... 1CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .................................................................. 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ BỆNH TẮC NGHẼN MẠCH MÁU .................................3 1.1.1. Sơ lược về bệnh tắc nghẽn mạch máu ........................................................3 1.1.2. Quá trình đông máu và cơ chế tan huyết khối ............................................3 1.1.3. Một số thuốc điều trị tắc nghẽn mạch máu ................................................6 1.2. KHÁI QUÁT VỀ ENZYME THỦY PHÂN FIBRIN ......................................9 1.2.1. Một số nguồn sinh tổng hợp enzyme thủy phân fibrin ..............................9 1.2.2. Phân loại enzyme thủy phân fibrin ...........................................................11 1.3. KHÁI QUÁT VỀ ENZYME LUMBROKINASE .........................................12 1.3.1. Cấu trúc và đặc tính của lumbrokinase ....................................................12 1.3.2. Tình hình nghiên cứu lumbrokinase ở Việt Nam .....................................15 1.3.3. Tình hình nghiên cứu lumbrokinase trên thế giới ....................................16 1.4. HỆ BIỂU HIỆN PICHIA PASTORIS .............................................................19 1.4.1. Khái quát về hệ biểu hiện Pichia pastoris................................................19 1.4.2. Chuyển gen ngoại lai vào genome nấm men............................................22CHƢƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP................................................... 24 2.1. VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT ..........................................................................24 2.1.1. Vật liệu .....................................................................................................24Vũ Thị Bích Ngọc ii Cao học K20Luận văn thạc sĩ Khoa Sinh học 2.1.2. Hóa chất ...................................................................................... ...