Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu biến đổi số lượng bản sao ADN ti thể ở bệnh nhân ung thư vú

Phương pháp HPLC là phương pháp định lượng cơ bản kinh điển trong phân tích hóa sinh học. Phương pháp này có độ nhạy cao, có khả năng ứng dụng rộng rãi, cho phép phân tích với lượng mẫu nhỏ. Với sự pháp triển của khoa học hiện đại, nhiều phần mềm đã được ra đời phục vụ mục đích bán định lượng dựa trên phân tích hình ảnh các băng điện di như phần mềm ImageJ – NIH US, đây là phương pháp đơn giản, ít tốn kém, tiện dụng, cho kết quả nhanh và có thể áp dụng rộng rãi. Trên cơ sở đó, tác giả đã ứng dụng phương pháp HPLC và phân tích hình ảnh bằng phần mềm ImageJ để thực hiện đề tài “Nghiên cứu biến đổi số lượng bản sao ADN ti thể ở bệnh nhân ung thư vú”
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu biến đổi số lượng bản sao ADN ti thể ở bệnh nhân ung thư vú ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -- Nguyễn Hồng Nhung NGHIÊN CỨU BIẾN ĐỔI SỐ LƯỢNG BẢN SAO ADN TI THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội-2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -- Nguyễn Hồng Nhung NGHIÊN CỨU BIẾN ĐỔI SỐ LƯỢNG BẢN SAO ADN TI THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌCNgười hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Trịnh Hồng Thái TS. Đỗ Minh Hà Hà Nội-2015 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên em xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn và kính trọng sâu sắc đốivới thầy, PGS. TS. Trịnh Hồng Thái, người đã tận tình hướng dẫn em trong suốtquá trình học tập và thực hiện luận văn này. Thầy đã mở ra cho em những vấn đềkhoa học rất lý thú, hướng em vào nghiên cứu các lĩnh vực hết sức thiết thực và vôcùng bổ ích, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập và nghiên cứu. Em đãhọc hỏi được rất nhiều ở Thầy phong cách làm việc, cũng như phương pháp nghiêncứu khoa học. Em cũng xin trân trọng cảm ơn đến TS. Đỗ Minh Hà và thầy giáo, cô giáotrong khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, đặc biệt là các thầy côgiáo trong bộ môn Sinh lý Thực vật và Hóa sinh học đã tận tình giảng dạy dìu dắttôi trong suốt thời gian học tập tại trường. Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các anh chị đã tận tình giúp đỡ và chỉbảo tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn tại Phòng Proteomics vàSinh học Cấu trúc thuộc Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzyme vàProtein, các bạn học viên cao học và các em sinh viên làm việc tại phòng, nhữngngười đã làm cùng tôi, luôn ở bên tôi lúc thất bại hay những lúc thành công. Trong quá trình thực hiện đề tài, tôi đã nhận được sự giúp đỡ và tạo điềukiện thuận lợi của PTNTĐ Công nghệ Enzym và Protein, Trường Đại học KHTN,sự giúp đỡ của các cán bộ nhân viên thuộc khoa Tế bào và Giải phẫu bệnh, bệnhviện K, Hà Nội trong việc cung cấp mẫu nghiên cứu. Tôi xin chân thành cảm ơn. Luận văn được thực hiện trong phạm vi nội dung và kinh phí củađề tài cấpnhà nước (mã số KC.04.10/11-15). Tôi xin chân thành cảm ơn. Con xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Bố, Mẹ người đã vất vả nuôi con khônlớn và dạy con những bài học làm người đầu tiên, con cảm ơn ông bà, côchú…những người thân của con, những người luôn dành tình cảm và những lờiđộng viên con. Và cuối cùng tôi xin cảm ơn các bạn bè của tôi, những người luôn ủng hộ vàgiúp đỡ tôi. Hà Nội, tháng 8 năm 2015 Học viên Nguyễn Hồng Nhung DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮTADN Acid DeoxyribonucleicAPS Ammonium persulfateARN Acid RibonucleicATP Adenosine TriphosphateAcN AcetonitrileBp Base pair (cặp bazơ)cs cộng sựEDTA Ethylenediaminetetraacetic AcidEtBr Ethidium BromideHCC Ung thư biểu mô tế bào gan (Hepatocellular carcinoma)HPLC Sắc kí lỏng hiệu năng cao (High-performance liquid chromatography)MT/mt Mitochondria (ti thể)mtADN ADN ti thể (mitochondrial DNA)nADN ADN nhân (nuclear DNA)PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp (polymerase chain reaction)Smac/DIABLO Chất hoạt hóa caspase thứ hai từ ti thể/ chất ức chế trực tiếp của protein gắn trong quá trình apoptosis trong điều kiện pI thấp. (Second mitochondria-derived activator of caspase/direct inhibitor of apoptosis-binding protein with low pI)TEA TriethylamineTEAA Triethylammonium acetatetARN ARN vận chuyển (transfer RNA)rARN ARN ribosome (RNA ribosome) DANH MỤC CÁC BẢNGBảng 1 Các hóa chất chính sử dụng cho nghiên cứuBảng 2 Thành phần hóa chất chạy HPLCBảng 3 Thành phần phản ứng PCRBảng 4 Thành phần phản ứng PCR thể tích 15 µlBảng 5 Công thức đổ gel polyacrylamide 10% bản 7cm Số liệu phân tích HPLC với các mẫu có tỉ số hàm lượng ADN chuẩnBảng 6 400bp/100bp khác nhau Số liệu phân tích HPLC với các mẫu có tỉ số lượng mt/ACTB khácBảng 7 nhau Biến đổi tỉ số mt/ACTB trong các loại mẫu ở bệnh nhân ung thư vúBảng 8 và bệnh nhân u xơ vú Biến đổi tỉ số mt/ACTB và đặc điểm bệnh học ở bệnh nhân ung thưBảng 9 vú Biến đổi t ...