Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng

Mục đích của luận văn: Phát hiện đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng bằng kỹ thuật PCR-RFLP; đánh giá mối liên quan giữa đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể với các đặc điểm lâm sàng của bệnh ung thư đại trực tràng ở người Việt Nam.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --------  ------- NGUYỄN THỊ NGỌC TÚPHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN tARN VÀ ND3 CỦA ADNTY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --------------------------------- Nguyễn Thị Ngọc TúPHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN tARN VÀ ND3 CỦA ADNTY THỂ Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS. Trịnh Hồng Thái Hà Nội – 2012 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. TS. Trịnh Hồng Thái, ngườithầy đã rất quan tâm, tận tình chỉ bảo, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình học tập vàthực hiện luận văn này. Trong quá trình học tập, làm việc và thực hiện luận văn, tôi đã nhận được sựgiúp đỡ của TS. Đỗ Minh Hà và các anh chị, các bạn sinh viên làm việc tại PhòngProteomics và Sinh học cấu trúc thuộc Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệEnzyme và Protein, trường Đại học Khoa học tự nhiên. Tôi xin chân thành cảm ơn. Trong quá trình thực hiện luận văn, tôi đã nhận được rất nhiều sự quan tâm,giúp đỡ của các cán bộ nhân viên thuộc khoa Tế bào và Giải phẫu bệnh, Bệnh việnK Tam Hiệp, Hà Nội và khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Việt Đức, Hà Nội. Tôi xinchân thành cảm ơn. Trong quá trình học tập và thực hiện luận văn, Ban lãnh đạo và bạn bè đồngnghiệp Bệnh viện 19-8 đã tạo điều kiện cho tôi có thời gian học tập, nghiên cứu đểhoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn. Cuối cùng, tôi vô cùng biết ơn gia đình và bạn bè đã khích lệ, động viên vàluôn bên tôi trong suốt thời gian qua. Hà Nội, tháng 12 năm 2012 Học Viên Nguyễn Thị Ngọc Tú MỤC LỤCBẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT ......................................................... aDANH MỤC CÁC BẢNG ...................................................................................... cDANH MỤC CÁC HÌNH ....................................................................................... dMỞ ĐẦU ................................................................................................................ 1Chương 1- TỔNG QUAN ....................................................................................... 3 1.1. TY THỂ........................................................................................................ 3 1.1.1. Hệ genome ty thể ................................................................................... 3 1.1.2. Đột biến ADN ty thể và bệnh ty thể ....................................................... 5 1.1.3. Đột biến ADN ty thể và bệnh ung thư .................................................... 7 1.2. UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG ................................................................ 10 1.2.1. Khái quát về ung thư đại trực tràng ...................................................... 10 1.2.2. Nguyên nhân gây ung thư đại trực tràng............................................... 11 1.2.3. Phân loại các dạng ung thư đại trực tràng theo mô học ......................... 12 1.2.4. Các phương pháp chẩn đoán ung thư đại trực tràng [20] ...................... 15 1.3. ĐỘT BIẾN ADN TY THỂ VÀ BỆNH UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG .. 16 1.3.1. Đột biến gen tARN của ADN ty thể ..................................................... 17 1.3.2. Đa hình trên gen ND3 của ADN ty thể ................................................. 19 1.3.3. Các phương pháp phát hiện đột biến gen ty thể giúp chẩn đoán bệnh ... 22 1.3.4. Tình hình nghiên cứu ở trong nước ...................................................... 24CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP ........................................... 26 2.1. NGUYÊN LIỆU ......................................................................................... 26 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu........................................................................... 26 2.1.2. Hóa chất ............................................................................................... 26 2.1.3. Thiết bị ................................................................................................ 27 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ............................................................... 28 2.2.1. Tách chiết ADN tổng số từ mô ............................................................. 28 2.2.2. Khuếch đại đoạn gen 10398 và đoạn gen 3243 ADN ty thể bằng PCR . 29 2.2.3. Phân tích RFLP .................................................................................... 31 2.2.4. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR và sản phẩm cắt bằng enzym giới hạn 32 2.2.5. Tinh sạch ADN .................................................................................... 35Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............................................................ 37 3.1. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN ĐIỂM A3243G CỦA GEN tARN TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP ............................................................... 37 3.1.1. Tách chiết ADN tổng số từ mẫu mô ung thư đại trực tràng .................. 37 3.1.2. Kết quả nhân đoạn gen 3243 của ADN ty thể ....................... ...