Luận văn : XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS, LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS. THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC part 5

Khảo sát khả năng tăng sinh khối và enzyme của Bacillus subtilis trên môi trường nhân giống cấp 2 Sau khi chọn lọc được môi trường nhân giống cấp 1 tốt nhất chúng tôi tiến hành xác định môi trường nhân giống cấp 2 tối ưu nhất. Cách bố trí thí nghiệm được thực hiện như sau: Môi trường sử dụng là môi trường bán rắn gồm 5 loại môi trường A, B, C, D và E có bổ sung CaCO3 2% để ổn định pH môi trường. Tất cả các loại môi trường trước khi đem nuôi cấy đều...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn : XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS, LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS. THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC part 5 28 3.3.1.2. Khảo sát khả năng tăng sinh khối và enzyme của Bacillus subtilis trên môitrường nhân giống cấp 2 Sau khi chọn lọc được môi trường nhân giống cấp 1 tốt nhất chúng tôi tiến hành xác địnhmôi trường nhân giống cấp 2 tối ưu nhất. Cách bố trí thí nghiệm được thực hiện như sau: Môi trường sử dụng là môi trường bán rắn gồm 5 loại môi trường A, B, C, D và Ecó bổ sung CaCO3 2% để ổn định pH môi trường. Tất cả các loại môi trường trước khiđem nuôi cấy đều được hấp khử trùng ở 121oC trong 15 - 20 phút. Các thành phần môitrường này được trình bày chi tiết ở mục 1.11 phần phụ lục. Lượng giống sử dụng ở môi trường nhân giống cấp 2 là 10%, với độ ẩm 60 – 65%, pH= 7. Từng loại môi trường được đặt trong các khay bằng nhựa có kích cỡ 0,5 × 0,25 ×0,08 m, mỗi khay chứa 0,6 kg môi trường. Trong quá trình nuôi phải giữ ẩm cho môitrường bằng cách phủ vải ẩm. Sau thời gian 72 giờ nuôi bắt đầu thu hoạch sau đó đemsản phẩm này kiểm tra số lượng tế bào vi khuẩn và hoạt độ enzyme amylase, protease. Sau khi kiểm tra trên tất cả các môi trường A, B, C, D và E chúng tôi tìm được môitrường nhân giống cấp 2 cho sinh khối và hoạt độ enzyme cao nhất để tiến hành sảnxuất. Mỗi môi trường thí nghiệm được lập lại 3 lần. Số lượng tế bào vi Hoạt độ Hoạt độ Môi khuẩn enzyme amylase enzyme protease trường Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lần 1 Lần 2 Lần3 A B C D E 29 3.3.1.3. Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis Sau khi tìm được môi trường nhân giống cấp 2 tối ưu nhất chúng tôi tiến hành sản xuấtchế phẩm chứa Bacillus subtilis. Cách thực hiện tương tự như thí nghiệm 3.3.1.2. Sau thờigian nuôi 72 giờ bắt đầu thu hoạch và đem sấy ở nhiệt độ 40 - 45oC trong 2 ngày sao chosản phẩm khô hoàn toàn. Sau đó đem đóng gói, kiểm tra và bảo quản. Quy trình sản xuấtđược thực hiện theo sơ đồ 3.2. Nước 60 – 65 % Môi trường nhân Khoáng hỗn so với nguyên liệu giống cấp 2 tối ưu hợp Hấp khử trùng 1210C trong 20 - 25 phút Làm nguội đến 37oC Đổ lên khay Giống Bacillus subtilis 10% Nuôi 72 giờ ở nhiệt độ phòng Đánh tơi Sấy khô 40 - 45oC Xay mịn Chế phẩm chứa Bacillus subtilis Đóng gói, kiểm tra và bảo quản Sơ đồ 3.2. Sơ đồ quy trình sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis 30 3.3.1.4. Kiểm tra số lượng tế bào vi khuẩn và hoạt độ enzyme Chế phẩm chứa Bacillus subtilis sau khi sấy khô tiến hành kiểm tra số lượng và hoạt độenzyme amylase, protease và sau thời gian bảo quản 10, 20, 30 ngày ở nhiệt độ phòng.Phương pháp kiểm tra tương tự như thí nghiệm 3.3.1.1. 313.3.2. Đối với Lactobacillus acidophilus Chế phẩm Antibio (chứa L. acidophilus) Phân lập MRSA Chọn khuẩn lạc điển hình MRSB tăng sinh (24 giờ /37oC) Kiểm tra sinh hóa Xác định Lactobacillus acidophilus Môi trường sữa đậu nành Môi trường sữa đặc có đường 24 giờ, nhiệt độ phòng Kiểm tra Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Độ chua Therne Chọn ra môi trường tối ưu Sản xuất chế phẩm chứa L. acidophilus trên môi trường tối ưu Kiểm tra, đóng gói và bảo quản Sơ đồ 3.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm đối với Lactobacillus acidophilus 32 ...