Nghiên cứu bào chế dung môi tách ARN từ nước tiểu, ứng dụng trong chẩn đoán một số tác nhân vi sinh vật gây bệnh

Bào chế thành công dung môi tách RNA tổng số từ bệnh phẩm nước tiểu. Bài viết nghiên cứu bào chế dung môi tách ARN từ nước tiểu, ứng dụng trong chẩn đoán một số tác nhân vi sinh vật gây bệnh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu bào chế dung môi tách ARN từ nước tiểu, ứng dụng trong chẩn đoán một số tác nhân vi sinh vật gây bệnhJOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY Vol.16 - No1/2021Nghiên cứu bào chế dung môi tách ARN từ nước tiểu, ứngdụng trong chẩn đoán một số tác nhân vi sinh vật gây bệnhDevelopment of an effective solvent for total RNA extraction from urinespecimen for detecting microbiological pathogensĐào Phương Giang, Ngô Tất Trung, Bệnh viện Trung ương Quân đội 108Trần Thị Thu Hiền, Nguyễn Thị Tĩnh, Phan Quốc HoànTóm tắt Mục tiêu: Bào chế thành công dung môi tách RNA tổng số từ bệnh phẩm nước tiểu. Đối tượng và phương pháp: Sử dụng các hoá chất hiện có dễ mua trong nước, pha chế thành dung môi tách chiết RNA tổng số từ các mẫu bệnh phẩm nước tiểu. Định lượng bằng kỹ thuật Real Time PCR theo nguyên lý Taqman Probe để đánh giá hiệu quả tách RNA bằng dung môi tự tạo. Kết quả: Pha chế thành công dung môi tách RNA tổng số từ nước tiểu có hiệu quả tách chiết tương đương với dung môi nhập ngoại. Kết luận: Dung môi tách ARN tổng số từ nước tiểu đã được tổng hợp thành công cho phép dùng trong các ứng dụng chẩn đoán một số tác nhân vi sinh vật gây bệnh. Từ khóa: Tách chiết RNA, 108@Uzol, Taqman-probe.Summary Objective: To successfully prepare solvents to extraction total RNA from urine specimens. Subject and method: Using existing chemicals that are readily available, blended into solvents to extract total RNA from urine specimens. Quantitative by real time PCR technique according to Taqman Probe principle to evaluate the efficiency of RNA separation with self-created solvent. Result: Successfully prepared solvent to separate total RNA from urine with extraction efficiency equivalent to that of commercial counterparts. Conclusion: Solvents for extraction of total RNA from urine were successfully prepared with extraction efficiency for detecting microbiological pathogens. Keywords: RNA extraction, 108@Uzol, Taqman-probe.1. Đặt vấn đề học có tiềm năng cao trong chẩn đoán sớm bệnh tật như: Nhiễm khuẩn huyết, ung thư, phát hiện Các mẫu bệnh phẩm có thể dễ dàng thu các tác nhân vi rút… Sử dụng nước tiểu để phátnhận như nước bọt, máu hoặc nước tiểu từ lâu hiện các virus RNA, xác định các microRNA, làđã được kỳ vọng là cung cấp các dấu ấn sinh khả thi có nhiều ưu điểm vì nước tiểu được lấy Ngày nhận bài: 23/12/2020, ngày chấp nhận đăng: mẫu dễ dàng, không xâm lấn, số lượng thu được25/12/2020 nhiều… Các ứng dụng phát hiện ARN trongNgười phản hồi: Phan Quốc Hoàn nước tiểu như các chỉ thị ung thư ở bệnh nhânEmail: drhoan108@gmail.com - Bệnh viện TWQĐ 108 ung thư buồng trứng, ung thư tuyến tiền liệt, hay 102JOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY Vol.16 - No1/2021các virus có vật liệu di truyền là ARN có trong Tối ưu thành phần UTRIzolnước tiểu như Ebola, Zika, Chinkugunia,... Để Phenol được làm tan chảy bằng cách ủ tạiđảm bảo chính xác của xét nghiệm, dung môi 65oC trong 30 phút, sau đó được acid hóa bằngtách ARN cần phải được chuẩn hóa và trải qua cách bổ sung dung dịch 1M Tris-HCl pH4.các thử nghiệm trước khi sử dụng trên mẫu bệnhphẩm. Tách chiết ARN bằng Trizol là một Dung môi tách ARN được pha chế bằngphương pháp phổ biến để tách chiết ARN trên cách bổ sung vào dung dịch theo trật tự sau:nghiên cứu của Chomczynsky P, Sacchi N năm Glycerol, phenol, amonium acetate, guanidine1987 và được xem xét một lần nữa vào năm thiocyanate và amonium thiocyante…. Dung môi2006 [1], [2]. Trizol biến tính proten và sau đó bổ này được định danh là 108@Uzol.sung chloroform gây ra sự phân tách pha, Chất lượng 108@Uzol được đánh giá bằngprotein được chiết suất sang pha hữu cơ, DNA ở cách so sánh nồng độ và chất lượng các mẫubề mặt phân cách, và ARN ở trong pha nước. Do ARN tách bằng dung môi 108@Uzol với nồng độvậy, ARN, ADN và protein được tách chiết từ và chất lượng ARN cùng nguồn gốc nhưng đượcmột mẫu duy nhất do vậy nó có tên là TRIzol. tách bằng dung môi Trizol chuẩn do hãngTuy nhiên, TRIzol đắt tiền ...