Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phôi người nuôi cấy ngày 3 trước đông lạnh và sau rã đông bằng kỹ thuật thủy tinh hóa

Bài viết nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc của phôi trước đông, sau rã đông bằng kỹ thuật thủy tinh hóa và khả n ng phát triển của phôi rã đông nuôi cấy sau 24 giờ.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc phôi người nuôi cấy ngày 3 trước đông lạnh và sau rã đông bằng kỹ thuật thủy tinh hóaTẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2018NGHI N CỨU BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI CẤU TRÚC PHÔI NGƢỜINUÔI CẤY NGÀY 3 TRƢỚC ĐÔNG LẠNH VÀ SAU RÃ ĐÔNGBẰNG KỸ THUẬT THỦY TINH HÓAĐoàn Thị Hằng*; Quản Hoàng Lâm*; Nguyễn Thanh Tùng*Trịnh Thế Sơn*; Trịnh Quốc Thành*; Dương Đình Hiếu*TÓM TẮTMục tiêu: đánh giá hình thái phôi trước đông và sau rã đông bằng phương pháp thủy tinhhóa, đánh giá khả năng phát triển của phôi rã đông sau nuôi cấy 24 giờ. Đối tượng và phươngpháp: nghiên cứu mô tả tiến cứu trên 250 phôi ngày 3 đông lạnh và rã đông bằng phương phápthủy tinh hóa (Vitrification) của 79 bệnh nhân tại Trung tâm Công nghệ Phôi. Kết quả và kếtluận: so với phác đồ đông lạnh chậm trước đây, đông lạnh phôi bằng phương pháp thủy tinhhóa là một kỹ thuật tiết kiệm thời gian và kinh tế, hiệu quả cho tỷ lệ phôi sống sau rã đông95,2%, tỷ lệ phôi phân chia tiếp sau rã đông 68,4%, không thấy biến đổi đáng kể hình thái phôisau rã đông.* Từ khóa: Phôi người đông lạnh; Hình thái cấu trúc phôi; ỹ thuật thủy tinh hóa.Transformation of Morphological Structure of Day-Three HumanEmbryos before Freezing and After Thawing by Vitrification TechniqueSummaryObjectives: To assess embryological morphology before freezing and after thawing byvitrification technique and development of embryos after 24 hours cultivation. Subject andmethods: The prospective descriptive study was performed in 250 cryopreserved embryos inday 3 by vitrification of 79 patients in the Centre of Advanced Technological Embryology.Results and conclusion: Vitrification technique is far more efficient than the programmed slowfreeze protocols, time saving and economical. The survival rates was 95.2%, and thedeveloping rates was 68.4%, without the considerable changes after thawing in morphology.* Keywords: Frozen embryo human; Morphological structure; Vitrification technique.ĐẶT VẤN ĐỀĐông lạnh phôi bằng kỹ thuật thuỷ tinhhoá (Vitrification) đã được thử nghiệm thànhcông trên phôi động vật từ năm 1985 8 .Trong kỹ thuật thủy tinh hóa, quá trìnhlàm lạnh mẫu với thời gian rất nhanh,* Học viện Quân yNgười phản hồi (Corresponding): Đoàn Thị Hằng (hangdt166@gmail.com)Ngày nhận bài: 26/02/2018; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 09/05/2018Ngày bài báo được đăng: 21/05/201843TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2018không xảy ra hình thành tinh thể nước đá- yếu tố chính ảnh hưởng đến khả năngsống và phát triển của phôi. Trong suốtquá trình hạ nhiệt độ, toàn bộ khối vậtchất bên trong và bên ngoài tế bào (TB)chuyển thành dạng khối đặc, trong suốt.Đông lạnh phôi bằng kỹ thuật thủy tinhhóa đang được các Trung tâm Hỗ trợSinh sản lớn trong khu vực và trên thếgiới thử nghiệm đưa vào ứng dụng tronglâm sàng.ống nghiệm, các phôi có TB đồng đều, tỷlệ mảnh vỡ bào tương (fragment) < 20%(phôi độ 3, độ 4).Tại Việt Nam, phương pháp này đượcthực hiện đầu tiên tại Bệnh viện Phụ sảnTừ Dũ từ tháng 5 - 2006, bước đầu thuđược kết quả tốt 1 . Trung tâm Côngnghệ Phôi bắt đầu thực hiện đông phôibằng kỹ thuật thuỷ tinh hoá từ tháng 9 2006.Tất cả phôi đông lạnh ngày 3 được rãđông để chuyển cho BN. Đông lạnh phôichỉ định cho các trường hợp: có phôi dưthừa sau chuyển phôi tươi; có hiện tượngquá kích buồng trứng mức độ vừa, nặng;không chuyển phôi được do không quađược cổ tử cung; niêm mạc tử cung chưatốt cho việc chuyển phôi tươi; nhữngtrường hợp cho - nhận noãn mà chuẩn bịniêm mạc tử cung chưa tốt.Để ứng dụng kỹ thuật này đạt hiệu quảcao, an toàn và góp phần hoàn thiện phácđồ đông lạnh phôi, đặc biệt là phác đồ đônglạnh phôi bằng kỹ thuật thủy tinh hóa,chúng tôi tiến hành nghiên cứu với mụctiêu: Đánh giá hình thái cấu trúc của phôitrước đông, sau rã đông bằng kỹ thuậtthủy tinh hóa và khả n ng phát triển củaphôi rã đông nuôi cấy sau 24 giờĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁPNGHI N CỨU1. Đối tượng nghiên cứu.250 phôi của 79 bệnh nhân (BN) cóphôi đông lạnh ở ngày 3 bằng kỹ thuậtthủy tinh hóa đã rã đông tại Trung tâmĐào tạo Nghiên cứu Công nghệ Phôi,Học viện Quân y.* Tiêu chuẩn lựa chọn phôi để trữ lạnh:Phôi nuôi cấy đến ngày thứ 3 trongmôi trường nuôi cấy của thụ tinh trong44* Tiêu chuẩn loại trừ: phôi giai đoạnsớm độ 1, độ 2: TB không đồng đều, tỷ lệmảnh vỡ bào tương ≥ 20%.2. Phương pháp nghiên cứu.* Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắtngang, tiến cứu.* Chọn mẫu nghiên cứu:* Chuẩn bị niêm mạc t cung:- Thuốc sử dụng: estrogen (provames2 mg, progynova 2 mg), progesteron(utrogestan 100 mg).- Cho BN uống provames 4 mg/ngàytừ ngày thứ 2 của chu kỳ kinh.- Siêu âm đo niêm mạc tử cung vàongày thứ 10 của chu kỳ kinh, chỉnh liềuprovames.- Ngày 12 - 14: siêu âm đo niêm mạctử cung: nếu niêm mạc tử cung ≥ 8 mm,bổ sung utrogestan 400 mg/ngày (đặt âmđạo).- Ngày 16 - 18 chuyển phôi.* Đánh giá hình thái phôi ngày 3:Quan sát hình thái cấu trúc phôi bằngkính hiển vi đảo ngược Olympus IX 70,độ phóng đại 200 lần:TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 5-2018Theo cách phân loại hình thái phôi củaAndres Salumet 4 dựa theo số phôi bào,bào tương phôi bào, tỷ lệ mảnh vỡ bàotương trong phôi: có 4 loại:dựa vào phần trăm thoái hoá TB theotiêu chuẩn hình thái học của Brian Dalevà Kay Elder(1997) [11]:+ Thoái hóa độ 1: thoái hoá < 25%.- Phôi độ 4: phôi có 6 - 8 TB đồng đều,không có mảnh vỡ bào tương.+ Thoái hóa độ 2: thoái hoá 25 - 50%.- Phôi độ 3: phôi có 6 - 8 TB đồng đều,mảnh vỡ bào tương chiếm < 20% thể tíchphôi.+ Thoái hóa độ 4: thoái hoá hoàn toàn.- Phôi độ 2: phôi có tỷ lệ mảnh vỡ bàotương chiếm 20 - 50% thể tích phôi.- Phôi độ 1: phôi có tỷ lệ mảnh vỡ bàotương chiếm > 50% thể tích phôi.* Đánh giá hình thái phôi sau rã đông:- Phôi ngày 3 sau rã đông: phôi ngày 3được đánh giá là phôi sống khi có > 50%phôi bào sống sau rã đông. Nếu phôi cònnguyên vẹn, chia thành 4 độ như phôitrước đông, đánh giá các phôi thoái hoá+ Thoái hóa đ ...