Nghiên cứu chuyển gen Chitinase - glucanase kháng nấm vào cây cà chua thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

Cà chua là một loại rau quả chính đã phổ biến rất lớn trong thế kỷ qua. Nó được trồngtrong hầu hết các nước trên thế giới. Phát triển các giao thức cho lựa chọn trong ống nghiệm có thể cung cấptiến bộ mới để sản xuất căng thẳng giống khoan dung.Mục tiêu nghiên cứu là phát triển cây trồng chuyển gen từ giống cà chua được lựa chọn Việtthực hiện và thể hiện một gen chitinase theo một promoter yếu.Giả thuyết là các cây cà chua biến đổi gen thể hiện gen này đã tăng cườngđề kháng với bệnh...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu chuyển gen Chitinase - glucanase kháng nấm vào cây cà chua thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam NGHIÊN C U CHUY N GEN Chitinase - glucanase KHÁNG N M VÀO CÂY CÀ CHUA THÔNG QUA VI KHU N Agrobacterium tumefaciens Bùi Th Lan Hương1, Nguy n Th Trư ng4, Vũ Duy Thanh2, Nguy n Th Kim Lý2, Nguy n c Doanh2, Phan T Phư ng2, Nguy n H ng Minh , Lê Th Ánh H ng2 3 SUMMARY Study of antifungal genetransformation on tomatoTomato is a major vegetable crop that has tremendous popularity over the last century. It is grownin almost every country of the world. Development of protocols for in vitro selection can providenew advances for the production of stress tolerant cultivars.Research objective is to develop transgenic plants from selected Vietnamese tomato cultivarscarrying and expressing a chitinase gene under a constitutive promoter.The hypothesis is that the transgenic tomato plants expressing this gene will have enhancedresistance to economically important fungal diseases, which are a problem for warm and humidclimatic conditions.Research results presented concerning study on the regeneration capacity of tomato varietiesP375 after Agrobacterium mediated transformation. The experimental data show low generationcapacity after transformation in P375 variety in both cotyledon (4,32) and hypocotyls (2,63).In this result we obtained two tomato lines confirmed the presence of Chitin’s gene with 788 bp.The primers were used in this investigation are:CHIF. 5’ATGGGGAAGAATAGGATGATG-3’;CHIR.5’GCCGACAGTGGTCCCAAAGAT-3’Further testing including tests of the field growth. Plant is necessary to identify individualtransformed lines with resistance.Keywords: Callus, Cotyledon, Hypocotyls, genotype, ELISA, , Cytokine, Auxin.I. TV N k t h p gi a các gen Chitinase và Glucanase Chuy n gen là phương pháp gây bi n d di còn t o ra cây chuy n gen có kh năng khángtruy n có nh hư ng cây tr ng (Rosen và b nh cao hơn v i ph r ng hơn so v i nh ngcs., 2003; Veluthambi và cs., 2003; Sung Hun cây tr ng ư c chuy n t ng gen ơn lPark và cs., 2003) ã và ang ư c áp d ng (Jongedyk e và cs., 1995; Zu và cs., 1994;r ng rãi trong nh ng năm g n ây. Trong Lawrence và cs., 2000).nghiên c u t o ra cây chuy n gen kháng b nh, N i dung trình bày dư i ây là m t scác nhà khoa h c ã phát hi n ư c gen k t qu nghiên c u bư c u v chuy n genChitinase trong cây tr ng có kh năng h n ch vào gi ng cà chua P375 thông qua ch ng vis phát tri n các lo i n m gây b nh cây như khuNn Agrobacterium tumefaciens EHA 105Fusarium, Botrytis cinerea, Rhizoctonia, h n có ch a plasmid pCAMBIA 1300 mang gench s phát tri n c a n m Verticillium dahliae kháng n m Chitinase (ngu n tách t uch ng 1 và 2 (Z.K. Punja, 2001; Schlumbaum, Pysium), ư c ti n hành t i Phòng B nh phânA. và cs., 1986) và m t s b nh n m khác. S t th c v t; Vi n Di truy n N ông nghi p.Ghi chú: 1Vi n Môi trư ng ông nghi p, Hà i, 2Vi n Di truy n ông nghi p, 3 Trư ng i h c ông nghi p Hà i, 4Trư ng Trung c p ông nghi p, Hà i 1 T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt NamII. V T LI U VÀ PHƯƠN G PHÁP ELISA. Các m u ư c s d ng trong thíN GHIÊN C U nghi m này là các b ph n tr lá m m (hypocotyl) và lá m m (cotyledone) c a các1. V t li u nghiên c u cây cà chua ư c nuôi c y trong in vitro. - Các gi ng cà chua P375 ư c l a - Vector mang gen kháng n mch n là gi ng có kh năng cho tái sinh cao, Chitinase ư c cung c p t IN RA- Pháp. ã ư c ki m tra b nh b ng k thu t C u trúc vector: Hình 1. C u trúc vector mang gen kháng n m Chitinase - Ch ng vi khuNn Agrobacteriumtumefaciens EHA105 có ch a plasmid III. K T QU VÀ TH O LU NpCAMBIA 1300 CHI-GLUC, mang 2 gen 1. ghiên c u kh năng tái sinh c akháng n m: Chitinase, Glucanase và genkháng Hygomicine (hpt). Gen hpt có gi ng cà chuapromoter 35S, còn gen Chitinase - Glucanase Nh ng k t qu nghiên c u c a c acó promoter A9, c 2 promoter này u ho t các nhà khoa h c (Shahin và cs.,1986; ng r t m nh genome th c v t, Chyi và Phillips, 1987; Mc. Cormick, - Gen kháng n m Chitinase ư c tách ...