Nghiên cứu kỹ thuật multiplex RT-QPCR để kiểm tra chỉ tiêu Staphylococcus aureus và Pseudomonas aeruginosa trong mỹ phẩm

Nghiên cứu đặt mục tiêu khảo sát kỹ thuật multiplex RT-qPCR để kiểm tra đồng thời chỉ tiêu S. aureus và P. aeruginosa trong mỹ phẩm và cũng có thể áp dụng cho các mẫu dược phẩm, chỉ tiêu E. coli và C. albicans sẽ được khảo sát trong nghiên cứu tiếp theo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu kỹ thuật multiplex RT-QPCR để kiểm tra chỉ tiêu Staphylococcus aureus và Pseudomonas aeruginosa trong mỹ phẩm Nghiên cứu Dược học Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh - Dược học;27(6):55-63 ISSN : 1859-1779 https://doi.org/10.32895/hcjm.p.2024.06.07Nghiên cứu kỹ thuật multiplex RT-QPCR để kiểm tra chỉtiêu Staphylococcus aureus và Pseudomonas aeruginosatrong mỹ phẩmTrần Quang Ngọc Dũng1, Lê Văn Hoài Trân1, Lê Văn Thanh2, Trịnh Túy An1, Vũ Thanh Thảo1,3,*1 Trung tâm Khoa học Công nghệ Dược Sài Gòn, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Thành phố Hồ Chí Minh,Việt Nam2 Bệnh viện Chợ Rẫy, Thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam3 Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Thành phố Hồ Chí Minh, Việt NamTóm tắtĐặt vấn đề: Theo hướng dẫn của TCVN 13634:2023, chỉ tiêu Staphylococcus aureus (S. aureus) và Pseudomonasaeruginosa (P. aeruginosa) là yêu cầu bắt buộc trong kiểm tra giới hạn nhiễm khuẩn của mỹ phẩm. Kỹ thuật mutiplexRT-qPCR cho phép phát hiện nhanh và đồng thời các vi sinh vật chỉ thị dựa trên các gen đặc hiệu với độ nhạy và chínhxác cao.Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật multiplex RT-qPCR để kiểm tra chỉ tiêu S. aureus và P. aeruginosa trong mỹ phẩm.Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Mồi và đoạn dò được đánh giá in vitro để lựa chọn nồng độ thích hợp. Quy trìnhđịnh tính các vi khuẩn bằng mutiplex RT-qPCR được thẩm định độ đặc hiệu, tính tuyến tính và độ chính xác theo hướngdẫn của Broeders. Sau đó, hiệu quả pháp hiện của phương pháp multiplex RT-PCR được so sánh với phương pháp visinh trên 30 mẫu mỹ phẩm giả định.Kết quả: Kết quả thu được chứng minh rằng phương pháp multiplex RT-qPCR, sử dụng cặp mồi gyrB_F/gyrB_R (400nM) với đoạn dò gyrB_P-GS (200 nM) đối với S. aureus và cặp mồi pbp-2_F/pbp-2_R (400 nM) với đoạn dò pbp-2 P-GS (200 nM) đối với P. aeruginosa, đạt được độ đặc hiệu, tính tuyến tính và độ chính xác (RSD< 25%). Phương phápmultiplex RT-qPCR phát hiện S. aureus và P. aeruginosa cho thấy có hiệu quả phát hiện tương đương với phương phápvi sinh theo TCVN 13634:2023 trên mẫu mỹ phẩm giả định.Kết luận: Kỹ thuật mutiplex RT-qPCR có thể áp dụng để kiểm tra chỉ tiêu S. aureus và P. aeruginosa trong giới hạn nhiễmvi sinh vật của mỹ phẩm.Từ khóa: mutiplex RT-qPCR; Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosa; giới hạn nhiễm vi sinh vậtNgày nhận bài: 17-12-2024 / Ngày chấp nhận đăng bài: 24-12-2024 / Ngày đăng bài: 28-12-2024*Tác giả liên hệ: Vũ Thanh Thảo. Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam.E-mail: vuthanhthao@ump.edu.vn.© 2024 Bản quyền thuộc về Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh.https://www.duoc.tapchiyhoctphcm.vn 55 Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh - Dược học * Tập 27 * Số 6* 2024AbstractMULTIPLEX RT-QPCR TECHNIQUE FOR TESTINGSTAPHYLOCOCCUS AUREUS AND PSEUDOMONAS AERUGINOSAIN COSMETICSTran Quang Ngoc Dung, Le Van Hoai Tran, Le Van Thanh, Trinh Tuy An, Vu Thanh ThaoIntroduction: To ensure cosmetic products meet acceptable microbiological standards, Vietnamese standardTCVN 13634:2023 mandates testing for microorganisms such as Staphylococcus aureus (S. aureus) andPseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa). Multiplex RT-qPCR offers a rapid and simultaneous detection method forthese indicator microorganisms by targeting specific genes, exhibiting good analytical performance and high specificity.Objective: This research focused on the application of the multiplex RT-qPCR technique for detecting S. aureusand P. aeruginosa to assess the microbial quality of cosmetics.Methods: In this study, primers and probes were evaluated in vitro to determine optimal concentrations. Theidentification of indicator bacteria using multiplex RT-qPCR was validated for specificity, accuracy, and precisionfollowing Broeders guidelines. The detection efficiency of the developed multiplex RT-qPCR method was thencompared with that of the standard microbiological method using 30 simulated cosmetic samples.Results: The obtained results demonstrated the acceptable specificity, linearity, and accuracy (RSD< 25%) of themultiplex RT-qPCR method, utilizing the gyrB_F/gyrB_R primer pair (400 nM) with the gyrB_P-GS probe (200 nM)for S. aureus and the pbp-2_F/pbp-2_R primer pair (400 nM) with the pbp-2 P-GS probe (200 nM) for P. aeruginosa.The multiplex RT-qPCR method displayed comparable detection efficiency to the standard microbiological method asspecified in TCVN 13634:2023 when tested on the simulated cosmetic samples.Conclusion: The developed multiplex RT-qPCR technique is a suitable method for testing for S. aureus and P. aeruginosaas indicators of microbiological quality in cosmetics.Keywords: multiplex RT-qPCR; Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosa; microbiological limits1. ĐẶT VẤN ĐỀ đến loài vi sinh vật. Tuy nhiên, các phương pháp trên cần thời gian thực hiện kéo dài và phải thực hiện nhiều bước tiến Để đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng, mỹ phẩm phải hành để định danh vi sinh vật nhiễm trong mẫu đến mức độtuân thủ các giới hạn nhiễm vi sinh vật nghiêm ngặt trước loài [2]. Phương pháp qPCR hoặc multiplex qPCR phát hiệnkhi được đưa ra thị trường. Điều này giúp ngăn ngừa biến dựa trên gen đặc hiệu cho các chủng vi sinh vật vì vậy giúpđổi chất lượng sản phẩm và bảo vệ người dùng khỏi tác hại rút ngắn thời gian để phát hiện, mặt khác phương pháp có độtiềm ẩn. Theo quy định của tiêu chuẩn quốc gia TCVN nhạy và độ đặc hiệu cao. Đối với multiplex qPCR có thể phát13634:2023, tương đươn ...