Nghiên cứu một số đặc tính của dòng tế bào lai B4D10C9 sinh kháng thể đơn dòng gây ngưng kết kháng nguyên B trên bề mặt hồng cầu

Hàm lượng kháng thể trong môi trường nuôi thu tại thời điểm 150 giờ nuôi cấy tương đương 100 µg/ml. Như vậy, tế bào lai B4D10C9 sinh trưởng và tiết kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên B tốt hơn khi nuôi trong môi trường DMEM chứa 10% huyết thanh bê. Việc bảo quản, lưu giữ và phục hồi không làm ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và sinh kháng thể của dòng tế bào này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu một số đặc tính của dòng tế bào lai B4D10C9 sinh kháng thể đơn dòng gây ngưng kết kháng nguyên B trên bề mặt hồng cầuTạp chí Công nghệ Sinh học 15(2): 243-249, 2017NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA DÒNG TẾ BÀO LAI B4D10C9 SINH KHÁNGTHỂ ĐƠN DÒNG GÂY NGƯNG KẾT KHÁNG NGUYÊN B TRÊN BỀ MẶT HỒNG CẦUNguyễn Thị Trung, Trương Nam HảiViện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam*Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail: tnhai@ibt.ac.vnNgày nhận bài: 16.9.2016Ngày nhận đăng : 20.5.2017TÓM TẮTDòng tế bào lai B4D10C9 sản xuất kháng thể đơn dòng gây ngưng kết đặc hiệu hồng cầu mang khángnguyên B thuộc lớp IgM và chuỗi nhẹ kappa đã được tạo ra trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi. Trongcông trình nghiên cứu này, các đặc điểm sinh học của dòng tế bào lai B4D10C9 như khả năng sinh trưởng, sinhkháng thể, sự ổn định về sinh trưởng và sinh kháng thể của dòng tế bào này được công bố. Dòng tế bào lai sinhtrưởng tốt trong môi trường DMEM bổ sung huyết thanh bê đến nồng độ cuối cùng là 1% và 10%. Tuy nhiên,khi nuôi trong môi trường chứa 10% huyết thanh bê thì mật độ tế bào tối đa đạt 9,9x105 tế bào/ml sau 50 giờnuôi cấy. Hiệu giá kháng thể tối đa trong dịch nuôi cấy đạt 1/512 sau thời điểm 150 giờ nuôi cấy. Nhưng nuôidòng tế bào này trong môi trường bổ sung 1% huyết thanh bê thì mật độ tế bào tối đa đạt 3,4x105 tế bào/ml sau72 giờ nuôi cấy. Hiệu giá kháng thể đạt cực đại là 1/64 kể từ thời điểm sau 50 giờ nuôi cấy. Tế bào được nuôicấy qua 3 thế hệ khác nhau và đánh giá khả năng sinh kháng thể của chúng qua từng thế hệ. Kết quả là, dòng tếbào này sinh trưởng và tiết kháng thể ổn định qua các thế hệ nuôi cấy. Hàm lượng kháng thể trong môi trườngnuôi thu tại thời điểm 150 giờ nuôi cấy tương đương 100 µg/ml. Như vậy, tế bào lai B4D10C9 sinh trưởng vàtiết kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên B tốt hơn khi nuôi trong môi trường DMEM chứa 10% huyếtthanh bê. Việc bảo quản, lưu giữ và phục hồi không làm ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và sinh khángthể của dòng tế bào này.Từ khóa: Kháng thể đơn dòng kháng B, nhóm máu B, tế bào lai, hiệu giá kháng thể, mật độ tế bàoĐẶT VẤN ĐỀPhát hiện ra nhóm máu A, B, O củaLandsteiner năm 1901 là bước tiến rất quan trọngtrong dịch vụ truyền máu, bởi vì việc xác định đượcchính xác nhóm máu của người cho và người nhậnđảm bảo an toàn trong truyền máu. Kháng nguyênA, B có mặt trên bề mặt tế bào hồng cầu. Người tathường sử dụng huyết thanh mẫu (chính là cáckháng thể đơn dòng đã biết) để xác định các khángnguyên này tồn tại hay hay không tồn tại trên bềmặt hồng cầu. Ở Việt Nam, toàn bộ huyết thanhmẫu đều được nhập khẩu từ các công ty của nướcngoài sản xuất. Hiện chưa có đơn vị nào phát triểnkháng thể đơn dòng từ nguồn kháng nguyên đặc thùcủa Việt Nam để sử dụng làm huyết thanh mẫu địnhnhóm máu. Do đó, chúng tôi tiến hành các nghiêncứu để phát triển một dòng tế bào lai có thể sảnxuất kháng thể đơn dòng đặc thù cho quần thểngười Việt. Kháng thể này sẽ được nghiên cứu đểphục vụ cho mục đích chẩn đoán nhóm máu. Bằngcông nghệ tế bào lai đã được Kohler và Milsteincông bố năm 1975 dòng tế bào lai đơn đã đượcsàng lọc để sản xuất kháng thể đơn dòng chỉ nhậnbiết một loại epitope duy nhất. Voak et al. (1980)công bố sản xuất được kháng thể đơn dòng kháng Atừ tế bào lai. Năm 1982, Gaur đã tạo được khángthể đơn dòng kháng B dùng làm chất định nhómmáu mà Voak et al. (1980) đã nghiên cứu phát triểnkháng thể kháng A và kháng B với giá thành hạ.Năm 1984, Fletcher et al. cũng đã phát triển thànhcông các kháng thể đơn dòng đặc hiệu nhóm máuA, B. Năm 2006, Iyer et al. đã tạo ra dòng tế bào lai2C4D5F10 sản xuất kháng thể đơn dòng kháng Bcó ái tính và độ đặc hiệu cao. Năm 2012,Abhyankar et al. đã công bố sàng lọc được dòng tếbào lai 3D5D7G2 sản xuất kháng thể đơn dòng đặchiệu hồng cầu B. Đặc biệt, đây là dòng tế bào đầutiên được phát triển ở Ấn Độ sử dụng nguồn khángnguyên là hồng cầu người bản địa. Giá thành củakháng thể đơn dòng mà công trình công bố chỉ bằng1/5 giá thành thương mại.243Nguyễn Thị Trung & Trương Nam HảiTại Việt Nam, Nguyễn Thị Trung et al. (2016)đã công bố tạo được dòng tế bào lai sản xuất khángthể đơn dòng gây ngưng kết nhóm máu mang khángnguyên A. Sau đó, Nguyễn Thị Trung et al. (2016),công bố tạo được dòng tế bào B4D10C9 sản xuấtkháng thể đơn dòng gây ngưng kết hồng cầu mangkháng nguyên B. Dòng tế bào lai được tạo ra cầnđược kiểm tra độ ổn định về khả năng sinh trưởng vàkhả năng tiết kháng thể trước khi được sử dụng đểsản xuất kháng thể. Kháng thể đơn dòng được sinh ravới cao hàm lượng cao trong dịch nuôi cấy là đíchmà tất cả các nhà sản xuất quan tâm. Vì thế, dòng tếbào lai B4D10C9 được nuôi cấy trong các môitrường khác nhau để tìm điều kiện tế bào sinh trưởngổn định hơn, tiết kháng thể ổn định và ở mức độ cao.Kháng thể đơn dòng trong dịch nuôi được cô đặc vàkiểm tra khả năng gây ngưng kết trực tiếp hồng cầu.Trong công trình này, các đặc điểm ...