NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH DNA BẰNG KĨ THUẬT PCR KẾT HỢP VỚI PHÉP ĐO ĐIỆN HOÁ

Trong những năm gần đây, Polymerase chain reaction (PCR) được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu về di truyền, phân tích pháp y, chuẩn đoán bệnh… Sản phẩm PCR thông thường được phân tích bằng kĩ thuật điện di phức tạp, đắt tiền và tiêu tốn nhiều thời gian. Trong bài báo này, chúng tôi trình bày một phương pháp điện hoá đơn giản, sử dụng Hoechts 33258, một chất có hoạt tính điện hoá và có khả năng khuếch tán vào cấu trúc xoắn kép của DNA, làm chất chỉ thị điện hoá để xác định sự có...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH DNA BẰNG KĨ THUẬT PCR KẾT HỢP VỚI PHÉP ĐO ĐIỆN HOÁNGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH DNA BẰNG KĨ THUẬT PCR KẾT HỢP VỚI PHÉP ĐO ĐIỆN HOÁ A STUDY ON AN ELECTROCHEMICAL BASED DETECTION METHOD FOR DNA AMPLIFICATION USING PCR Nguyễn Bá Trung* Trường Đại học Sư phạm trunghieu.osaka@gmail.com TÓM TẮT Trong những năm gần đây, Polymerase chain reaction (PCR) được sử dụng rộng rãi trong nghiêncứu về di truyền, phân tích pháp y, chuẩn đoán bệnh… Sản phẩm PCR thông thường được phân tíchbằng kĩ thuật điện di phức tạp, đắt tiền và tiêu tốn nhiều thời gian. Trong bài báo này, chúng tôi trìnhbày một phương pháp điện hoá đơn giản, sử dụng Hoechts 33258, một chất có hoạt tính điện hoá và cókhả năng khuếch tán vào cấu trúc xoắn kép của DNA, làm chất chỉ thị điện hoá để xác định sự có mặtcủa sản phẩm PCR bằng phương pháp đo Linear Sweep Voltametry (LSV) trên hệ 3 điện cực DEPchip. Kết quả nghiên cứu cho thấy, hiệu quả khuếch đại gen Beta Actin trong human DNA có thể đượcxác định hoàn toàn chính xác. So với phương pháp điện di, phương pháp được lập dựng trong bài báonày nhanh, chính xác và rẻ tiền hơn rất nhiều. Sự thành công của phương pháp này mở ra hướng ứngdụng trong phân tích y sinh, nghiên cứu sinh học phân tử và kiểm định thực phẩm … Từ khóa: Hoechts 33258; PCR; Chỉ thị điện hoá; Beta Actin; DEP chip ABSTRACT In recent years, Polymerase chain reaction (PCR) has been extensively used in genetic study,forensic science, and medical diagnosis… The PCR amplification product is normally analyzed by gelelectrophoresis in agarose or polyacrylamide matrix, which is a time consuming, expensive, andcomplicated method. In this work, an electrochemical method is proposed for the PCR amplificationdetection using Hoechts 33258, an electro-active and dsDNA intercalating dye, as an electrochemicalindicator for qualitative analysis of DNA amplification in combination with Linear Sweep Voltammetry(LSV) on a three electrode DEP (Disposable electrochemical printed) chip. The result shows that theamplification of Beta Actin gene from human template DNA can be detected in a short time. Comparedto gel electrophoresis, this method is much cheaper and time saving with high accuracy and sensitivity.The success of this method hopefully opens the door to medical analysis, biomolecule study, and foodsecurity applications. Keywords: Hoechts 33258; Polymerase chain reaction; electrochemical indicator; Beta Actin; DEPchip