Nghiên cứu quy trình chuyển gen vào giống thuốc lá C9-1 nhằm tạo cây thuốc lá chuyển gen kháng bệnh khảm lá

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Lê Quỳnh Liên, Phòng Công Nghệ Tế Bào Thực Vật, Viên Công Nghệ Sinh Học đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS.TS. Chu Hoàng Hà...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu quy trình chuyển gen vào giống thuốc lá C9-1 nhằm tạo cây thuốc lá chuyển gen kháng bệnh khảm lá Nghiên cứu quy trình chuyển genvào giống thuốc láC9-1 nhằm tạo cây thuốc lá chuyển gen kháng bệnh khảm lá LỜI CẢM ƠNTôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Lê Quỳnh Liên, Phòng Công Ngh ệTế Bào Thực Vật, Viên Công Nghệ Sinh Học đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo,giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này.Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS.TS. Chu Hoàng Hà, ThS. Ph ạm Thị Vâncùng tập thể cán bộ, học viên, sinh viên Phòng Công Ngh ệ Tế Bào Thực Vật,Viện Công Nghệ Sinh Học đã tạo điều kiện làm việc, giúp đỡ và truyền đạtnhiều kinh nghiệm làm việc quý báu trong suôt quá trình hoàn thành khóaluận này.Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo khoa Công Ngh ệ Sinh Học, ViệnĐại Học Mở Hà Nội đã nhiệt tình giảng dạy và tạo điều kiện thuận lợi cho emhọc tập và nghiên cứu.Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình và bạn bè nhứngngười đã luôn bên tôi, động viên và góp ý cho tôi trong suốt quá trình học tậpvà thực hiện khóa luận. Hà Nội, tháng 05 năm 2011 Sinh viên Nguyễn Thị Thu Hiền 1 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮTADN Deoxyribonucleic AcidARN Ribonucleic AcidBp Base pairdNTPs Deoxy Nucleoside TriphosphateLB Luria and BertaniPCR Polymerase Chain ReactionTaq Thermus aquaticusIAA Indolaxetic Acid α- naphthalenneacetic AcidNAAPVY Ptato virusTMV Tobacco Mosaic virusCMV Cucumber Mosaic virus Môi trường cơ bản theo Murashige và SkoogMSBAP 6- benzenladenine Gen mã hóa enzyme β -glucuronidaseGus Môi trường ra rễRMRNAi RNA interfenceX-gluc 5-bromo-4- chloro-3 - indolyl glucuronideEDTA Ethylene Diamine tetra - acetate Acid 2 M Ở Đ ẦUThuốc lá là một trong những cây trồng vừa có giá trị về kinh tế vừa là cây môhình quan trọng trong nghiên cứu công nghệ sinh học cây trồng. Vì vậy,thuốc lá là một trong những đối tượng được sử dụng nhiều nhất trong cácnghiên cứu cơ bản và ứng dụng đặc biệt là làm đối tượng chuyển gen.Khảm lá bệnh rất phổ biến trên cây thuốc lá, bệnh khảm lá gây thiệt hạinghiêm trọng đến năng suất và chất lượng thuốc lá, nhất lá đối với thuốc lásợi vàng. Bệnh khảm thuốc lá do hai loại virus TMV (Tobacco mosaic virus)và CMV (Cucumber mosaic virus) gây ra. Trong đó, TMV loại virus có phổký chủ rất rộng có tới 230 loài thuộc 32 họ và là một trong virus gây hại trênthực vật được mô tả sớm nhất ở nước ta.Những phương pháp thông dụng để khắc phục bệnh khảm lá như sử dụnggiống kháng bệnh, giống sạch bệnh và các biện pháp canh tác( trồng luậncanh cây thuốc lá với cây lúa, vệ sinh đồng ruộng...). Tuy nhiên, những biệnpháp này không những chỉ có tác dụng làm giảm bớt sự lây lan và phát triểncủa bệnh, chủ yếu chỉ manh tính chất phòng trừ chứ không thể chống lại bệnhnày mà còn đòi hỏi nhiều thời gian, công sức và ảnh hưởng xấu tới môitrường.Hiện nay, nhờ những tiến bộ mới trong kỹ thuật di truyền mà người ta đã tạora các giống cây trồng có khả năng kháng lại bệnh do virus gây ra bằng cáchđưa gen mã hóa protein vỏ (coat protein gene) của virus vào genome của thựcvật.Xuất phát từ cơ sở thực tiễn trên, giống thuốc lá C9-1 đã được lựa chọn chonghiên cứu “ Nghiên cứu qui trình chuyển gen vào giống thuốc lá C9-1 nhằmtạo cây thuốc lá chuyển gen kháng bệnh khảm lá” với các nội dung và mụ cđích nghiên cứu: (1) Chuẩn hóa phương pháp chuyển gen vào giống thuốc láC9-1 thông qua cấu trúc mang chỉ thị gus; (2) Tạo cây thuốc lá chuyển genmang cấu trúc TMV-RNAi; (3) Bước đầu phân tích cây chuyển gen bằngphương pháp PCR 3 Chương I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY THUỐC LÁ 1.1. 1.1.1. Phân loại Cây thuốc lá có tên khoa học là: Nicotinana.sp thuộc ngành hạt kínAngiosper, lớp 2 lá mầm Dicotylndones, phân lớp Asteridae, bộ hoa mõm sóiScrophulariales, họ cà Solanaceae, chi Nicotiana. Trong chi Nicotiana c ó 50-70 loài, đa số là dạng cỏ, một số dạng thân đứng, hầu hết là các dạng dại phụ.Căn cư vao hì nh thai, màu sắc của hoa người ta phân chia thành 4 loại chính: ́̀ ́ - Loài Nicotiana tabacum L.: có hoa màu hồng hay đỏ tươi . Đây la loai ̣̀ phô biên nhât chiêm 90% diên tí ch thuôc la trên thê giơi. ̉ ́ ́ ́ ̣ ́́ ́ ́ - Loài Nicotiana rustica L.: có hoa màu vàng, chiêm 10% diên tí ch th ...