Nghiên cứu tình trạng methyl hóa một số gen liên quan đến ung thư ở bệnh nhân ung thư vú tại Bệnh viện K

Bài viết đánh giá hiện tượng methyl hóa một số gen liên quan đến ung thư bao gồm BRCA1, MGMT, GSTP1, p16 và RASSF1A; đồng thời chỉ ra mối tương quan của dấu ấn methyl hóa với các đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng của bệnh nhân ung thư vú tại Bệnh viện K.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tình trạng methyl hóa một số gen liên quan đến ung thư ở bệnh nhân ung thư vú tại Bệnh viện KGIẢI PHẪU BỆNH - SINH HỌC PHÂN TỬ NGHIÊN CỨU TÌNH TRẠNG METHYL HÓA MỘT SỐ GEN LIÊN QUAN ĐẾN UNG THƯ Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ VÚ TẠI BỆNH VIỆN K NGUYỄN NGỌC QUANG1, VƯƠNG DIỆU LINH2, TRƯƠNG VĂN LONG3, TẠ VĂN TỜ4TÓM TẮT Ung thư vú là loại ung thư phổ biến ở phụ nữ, gây ra do nhiều yếu tố khác nhau như tiền sử gia đình(đột biến các gen BRCA1, BRCA2), chế độ dinh dưỡng, tuổi tác và những biến đổi của di truyền ngoại gen,trong đó methyl hóa các đảo CpG với sự bất hoạt của các gen đóng vai trò rất quan trọng. Do đó, methyl hóaDNA trở thành dấu chuẩn phân tử đầy tiềm năng trong chẩn đoán, tiên lượng và điều trị ung thư vú.Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá hiện tượng methyl hóa một số gen liên quan đến ung thư bao gồmBRCA1, MGMT, GSTP1, p16 và RASSF1A; đồng thời chỉ ra mối tương quan của dấu ấn methyl hóa với cácđặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng của bệnh nhân ung thư vú tại Bệnh viện K. Kết quả nghiên cứu mô tả cắtngang 82 mẫu bệnh nhân UTV thể ống xâm nhập cho thấy 57/82 (69.5%), 44/82 (53.7%), 38/82 (46.3%), 29/82(35.4%) và 47/82 (57.3%) trường hợp lần lượt bị methyl hóa BRCA1, MGMT, GSTP1, p16 và RASSF1A.Methyl hóa RASSF1A thể hiện mối tương quan với bệnh nhân trẻ tuổi, p GIẢI PHẪU BỆNH - SINH HỌC PHÂN TỬ Di truyền ngoại gen bao gồm methyl hóa DNA, ống xâm nhập được chẩn đoán giải phẫu bệnh bằngbiến đổi protein Histon và miRNA là một trong những phương pháp nhuộm Hematoxilin và Eosin (H&E).thay đổi phân tử phổ biến có sự liên quan mật thiết Bệnh phẩm được thu thập tại Trung tâm Giải phẫuđến sự hình thành tế bào ác tính và phát triển khối bệnh và Sinh học phân tử, Bệnh viện K trong giaiu[3]. Thay đổi mức độ methyl hóa DNA tham gia kiểm đoạn 2018 - 2019. Thông tin bệnh nhân và giai đoạnsoát tiêu cực, kìm hãm hoạt động của gen. Thực tế bệnh được ghi nhận tại các khoa lâm sàng, Bệnhcho thấy rất nhiều bệnh ung thư khác nhau có liên viện K.hệ với thay đổi mức độ methyl hóa promoter của các Tách chiết DNA tổng sốgen ức chế khối u, làm bất hoạt các gen này. Ngoàira, mức độ methyl hóa bất thường còn là dấu hiệu Bệnh phẩm UTV thể ống xâm nhập đúc trongtiên lượng bệnh tái phát hoặc di căn. Hoạt động của paraffin được cắt lát với độ dày 10µm. Mỗi mẫu gồmnhững gen liên quan đến tính nhạy cảm với hóa trị, 5 - 10 lát tùy vào độ lớn của mẫu được cho vào cácxạ trị có thể bị thay đổi bởi sự methyl hay khử methyl ống eppendort 1.5ml. DNA từ mẫu đúc paraffin đượcdẫn đến tính kháng[2]. Do đó mức độ methyl hóa trên tiến hành tách chiết bằng bộ kit QIAmp DNA FFPEDNA trở thành dấu chuẩn phân tử đầy tiềm năng Tissue Kit (Qiagen) theo hướng dẫn cụ thể của hãngtrong tiên lượng và chẩn đoán ung thư. sản xuất. Ung thư vú phát triển do các gen gây ung thư Xử lý bisulfitebị hoạt hóa hoặc do các gen ức chế khối u bị bất Xử lý bisulfite là chuỗi phản ứng hóa học củahoạt. Ở tế bào ung thư vú, methyl hóa DNA được sodium bisulfite xảy ra trên sợi đơn DNA ở nhiệt độquan sát thấy ở gen tham gia sửa chữa sai hỏng cao và pH thấp. Kết quả của quá trình xử lý bíulfiteDNA (BRCA1- breast cancer susceptibility gene, sẽ biến Cytosine thành Uracil, trong khi giữ nguyênMGMT- O-6-methylguanine-DNA methyltransferase), các Cytosine bị methyl hóa. Những mẫu sử dụngkiểm soát tự chết theo chương trình (RASSF1A - trong nghiên cứu được xử lý bisulfite bằng kit EpitectRas association domain family 1A gene), điều hòa Bisulfite kit (48) (Qiagen).chu kỳ tế bào (p16 - cyclin dependent kinaseinhibitor 2A), gen có chức năng khử các độc tố gây Kỹ thuật PCR đặc hiệu methyl hóa (Methylung thư (GSTP1- π-class glutathione S-transferase specific PCR (MS-PCR)) xác định tình trạnggene), gen mã thụ thể hormon (ER- estrogen methyl hóa gen BRCA1, MGMT, GSTP1, p16 vàreceptor gene, PR- progesterone receptor RASSF1Agene)…[13]. Điều đặc biệt, methyl hóa DNA không chỉ Kỹ thuật MS-PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệuphát hiện thấy trong các tế bào khối u mà còn có ở khuếch đại trình tự DNA sau khi xử lý bisulfite. Đểcác tế bào biểu mô xung quanh khối u, tuy nhiên tần xác định mức độ methyl hóa của một gen cần haisuất DNA bị methyl hóa phát hiện ở các tế bào liền cặp mồi đặc hiệu: (1) Cặp mồi khuếch đại trình tựkề khối u tăng cùng với tiến triển của khối u nguyên DNA không methyl hóa, (2) cặp mồi khuếch đại trìnhphát. Bởi vậy, việc nghiên cứu phát triển dấu chuẩn tự DNA bị methyl hóa. Các cặp mồi sử dụng trongmethyl hóa DNA, đặc biệt kết hợp nhiều dấu chuẩn ...