Nghiên cứu tương đồng di truyền và xác định độ thuần của một số tổ hợp tằm đang chọn tạo bằng dấu chuẩn phân tử RAPD

Ngẫu nhiên khuếch đại đa hình DNA (RAPD) phương pháp mô tả bởi Williams và Welsh &McClelland vào năm 1990 sử dụng mồi ủ để nhắm mục tiêu các trang web tương đồng phân phối ngẫu nhiên trongbộ gen của Bombyx mori L. Công nghệ này đã cung cấp một công cụ để phân tích di truyền của sinh họcđối tượng và nó đã được áp dụng succefully trong chọn lọc di truyền cũng như sinh sản cho nhiềuđối tượng nông nghiệp. Trong nghiên cứu này, mười RAPD mồi đã được khảo sát tiết lộ phân tử di truyềntương tự...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu tương đồng di truyền và xác định độ thuần của một số tổ hợp tằm đang chọn tạo bằng dấu chuẩn phân tử RAPD NGHIÊN C U TƯƠNG Đ NG DI TRUY N VÀ XÁC Đ NH Đ THU N C A M T S T H P T M ĐANG CH N T O B NG D U CHU N PHÂN T RAPD ng ình àn, Nguy n Th Thanh Bình SUMMARY Study on molecular genetic similarity of some selected Vietnamese silkworm combinations by RAPD markersRandom amplified polymorphic DNA (RAPD) method described by Williams and Welsh &McClelland in 1990 use primers annealing to homologous target sites randomly distributed in thegenome of Bombyx mori L. The technology has provided a tool for genetic analyses of biologicalsubjects and it has been applied succefully in genetic selection as well as breeding for manyagriculture subjects. In this research, ten RAPD primers were surveyed to reveal molecular geneticsimilarity of five selected Vietnamese silkworm combinations. The results obtained showed that thecoefficients of genetic similarity of silkworm combinations change from 0,62 to 0,93 and thegenotype homomorphism vary from 73,77% on combination C2 to 78,01% on combination A18.The method has been proved more efficient in comparison with the traditional assessment method.The possibility for applying the method in selection and breeding practice of Bombyx mori L. wasdiccused.Keywords: Bombyx mori L., genetic similarity, genotype homomorphism, RAPD.I. TV N II. V T LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP Trong t o gi ng, ngư i ta ã ti n hành 1. V t li uch n l c v i s tr giúp c a ch th phânt , ã có nh ng gi ng v t nuôi và cây Năm t h p t m lư ng h L2, C2,tr ng trong ó có t m dâu ư c ch n t o C21B, A18, A27 ang ch n t o thu c tàib ng phương pháp này. Vi t Nam, nuôi t o gi ng t m xuân thu c a Trung tâmt m là m t trong nh ng ngh có t lâu i, Nghiên c u Dâu T m Tơ.nhưng vi c ch n t o gi ng cho n nayv n ti n hành theo phương pháp truy n 2. Phương pháp nghiên c uth ng nên có m t s h n ch . Vì v y, 2.1. Tách chi t AD : Theo Wiliam vànghiên c u ng d ng các k thu t m i vào c ng s .công tác gi ng là v n c n thi t, trong ó 2.2. Xác nh n ng AD : B ngcó xác nh thu n c a gi ng và t h p phương pháp quang ph .lai trên cơ s phân tích a hình phân t c achúng b ng k thu t RAPD. ây là m t 2.3. Ki m tra AD : Trên gel agarozetrong nh ng k thu t ơn gi n, d th c 0,8% và ch p nh máy geldoc.hi n, giá thành th p hơn so v i nh ng k 2.4. hân gen: B ng k thu t PCR,thu t phân t khác, ư c nhi u phòng thí m i do hãng Invitrogen t ng h p. Th tíchnghi m trên th gi i s d ng hi u qu dùng cho m u là 20 µl. Chu trình nhi t theotrong hư ng nghiên c u trên. tài li u c a Chapterjee và c ng s . S n phNm PCR ki m tra trên gel ư c ã lo i h t ARN , các v ch g n và cóagaroze 1,3% - 1,5%. tr ng lư ng phân t l n hơn 21,6 kb. ADN 2.5. Phân tích k t qu : B ng Excel, ư c b o qu n l nh trong dung d ch TE.th ng kê sinh h c và ph n m m 1 2 3 4 5 MN TSYS.2.0. H s ng d ng ư c tính 21,6 kbtheo công th c c a N ei và Li.III. K T QU VÀ TH O LU N1. Tách chi t và tinh s ch AD t m ut m ADN ư c tách chi t t m u t m c acác t h p lai b ng kit c a Fermentas, cácbư c ti n hành th c hi n theo ch d n c a Hình 1. nh i n di ADnhà s n xu t g m nghi n m n m u trong 1 - 5: ADN c a 5 m u.dung d ch m tách chi t, phân hu protein M: ADN λ/EcoRI+HindIIIb ng proteaza K, lo i b t p ch t b ngphenol:chloroform, t a ADN b ng ethanol, s ch và n ng ADN ư c gi ilo i ARN b ng Rnaza, t a ti p b ng ethanol thi u b ng 1. K t qu b ng 1 cho th y t thu ADN s ch. S n phNm ADN ư c l OD260 nm/OD280 nm dao ng t 1,79 nch y i n di ki m tra, ánh giá trên gel 1,98 ch ng t ADN thu ư c có s chagaroze 0,8% và hình 1 là k t qu thu ư c. làm nguyên li u cho PCR trong cácK t qu hình 1 cho th y, s n phNm nh n nghiên c u ti p theo. B ng 1. K t qu ánh giá s ch c a AD tách chi t b ng kitTT OD260/280 TT OD260/280 TT OD260/280 TT OD260/280 1 1,84 14 1,82 27 1,86 ...