Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật One-step RT-PCR chẩn đoán nhanh virus gây bệnh vàng lụi (vàng lá di động) gây hại trên lúa ở Việt Nam

Bài viết trình bày nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật One-step RT-PCR chẩn đoán nhanh virus gây bệnh vàng lụi (vàng lá di động) gây hại trên lúa ở Việt Nam; One-step RT-PCR chẩn đoán virus gây bệnh vàng lụi lúa.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật One-step RT-PCR chẩn đoán nhanh virus gây bệnh vàng lụi (vàng lá di động) gây hại trên lúa ở Việt Nam T¹p chÝ khoa häc vμ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam2. Bộ Tài nguyên và Môi trường (2007). Kế 6. Phạm Quốc Hoàng (2013). Kết quả nghiên cứu hoạch quốc gia về thích ứng với biến đổi đánh giá các giống lúa chịu hạn tuyển chọn. khí hậu. Báo cáo kết quả nghiên cứu khoa học năm3. Bộ Tài nguyên và Môi trường (2009). Kịch 2013, Sở Nông nghiệp và PTNT Phú Yên. bản biến đổi khí hậu, nước biến dâng cho 7. Lê Quang Vịnh (2013). Kết quả nghiên cứu Việt Nam. đánh giá các giống lúa chịu hạn tuyển4. Cục Trồng trọt, tháng 8/2014. Báo cáo tổng chọn. Báo cáo kết quả nghiên cứu khoa học kết tình hình sản xuất lúa gạo 6 tháng đầu năm 2013, Chi cục BVTV tỉnh Khánh Hòa. năm 2014.5. Nguyễn Văn Hải (2013). Kết quả nghiên Ngày nhận bài: 7/2/2015 cứu đánh giá các giống lúa chịu hạn tuyển Người phản biện: PGS.TS. Nguyễn Văn Viết chọn. Báo cáo kết quả nghiên cứu khoa học Ngày phản biện: 24/2/2015 năm 2013, Trạm khuyến nông huyện Lệ Ngày duyệt đăng: 14/3/2015 Thủy, Quảng Bình. NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ONE-STEP RT-PCR CHẨN ĐOÁN NHANH VIRUS GÂY BỆNH VÀNG LỤI (VÀNG LÁ DI ĐỘNG) GÂY HẠI TRÊN LÚA Ở VIỆT NAM Tạ Hoàng Anh 1 , Nguyễn Văn Chung 1 , Nguyễn Doãn Phương 1 , Phạm Thị Lương 1 , Nguyễn Văn Tuất2 ABSTRACT One-step RT-PCR for detection of rice yellow stunt (Rise transitory yellowing) virus in VietnamOne-step RT-PCR was optimized for detection of Rice yellow stunt virus (RYSV) on rice and green leafhopper,the transmission vector. Three pairs of primer were designed and selected based on the genomic sequencesof RYSV downloaded from GenBank and used for detection of RYSV on infected samples in Vietnam. Differentparts of infected rice plant and green leafhopper were tested. All parts of infected rice plants including freshand dried samples can be used for the detection except the dried root. The same procedure was used andsucceeded in detecting the virus from single insect of GLH collected and preserved in absolute alcohol. Thisprotocol was used routinely at Plant Protection Research Institute for detection of RYSV on rice and GLHsamples collected from different provinces in Vietnam.Key words: Rice virus, transitory yellowing rirus, yellow stunt virus, detection, RT-PCRI. ĐẶT VẤN ĐỀ 12 Trong khoảng 1 thập niên trở lại đây, (Tạ Hoàng Anh và ctv., 2009; Anh et al.,các bệnh virus đã liên tục bùng phát và gây 2011; Anh et al., 2012a; Anh et al., 2012b).hại nghiêm trọng đến sản xuất lúa gạo trên Kỹ thuật PCR và one-step RT-PCR đã đượcphạm vi cả nước, đe dọa an ninh lương thực nghiên cứu và ứng dụng đem lại hiệu quả cao, góp phần quan trọng trong công tác nghiên cứu và chỉ đạo sản xuất của Viện1 Viện Bảo vệ Thực vật. Bảo vệ Thực vật (BVTV) trong các đợt2 Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam dịch diễn ra như dịch rầy nâu (RN), bệnh 9T¹p chÝ khoa häc vμ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Namvàng lùn (VL) và lùn xoắn lá (LXL) ở các quản trong bẹ chuối hoặc xử lý bằngtỉnh phía Nam những năm 2006-2008; dịch phương pháp ép khô mẫu trong giấy bảnlùn sọc đen phương Nam (LSĐPN) ở các (Anh et al., 2011 và 2012a) rồi gửi đếntỉnh miền Bắc và miền Trung vụ Mùa 2009 phòng thí nghiệm của Viện BVTV.và 2010; dịch vàng lụi ở Hiệp Hòa (Bắc Rầy xanh đuôi đen thu tại ruộng bệnhGiang) vụ Mùa 2009 và 2010 và tái bùng được bảo quản ngay trong cồn tuyệt đốiphát vụ Mùa 2013 và 2014. trước khi gửi đến phòng thí nghiệm của Các quy trình chẩn đoán bệnh VL, LXL Viện BVTV.và LSDPN bằng kỹ thuật one-step RT-PCRsử dụng các cặp mồi đặc hiệu đã được xây 2.2. Tách chiết RNA tổng số bằng Trizoldựng kịp thời và công bố trên các tạp chí Các bước cơ bản và thành phần hóatrong và ngoài nước (Tạ Hoàng Anh và ctv., chất được phỏng theo hướng dẫn của nhà2009; Anh et al., 2011). Một quy trình sản xuất (Invitrogen) và quy trình chẩntương ứng cũng đã được xây dựng và thử đoán virus gây bệnh VL và LXL (Tạ Hoàngnghiệm tại phòng thí nghiệm của Viện Anh và ctv., 2009).BVTV cho kết quả nhanh, chính xác và a) Tách chiết RNA tổng số từ mẫu lá:hiệu quả trong việc chẩn đoán nhanh virus 0,1 g mẫu tươi hoặc 0,03 g mẫu khô đượcgây bệnh vàng lụi (hay còn gọi vàng lá di nghiền bằng chày/cối sứ với 2 ml Trizol.động, hoặc vàng lá tạm thời) từ các mẫu Dịch nghiền được chuyển vào 1 ống tuýpcây lúa nhiễm bệnh và rầy xanh đuôi đen dung tích 1,5 ml, giữ ở nhiệt độ phòng 5(RXĐĐ)-môi giới truyền bệnh. phút trước khi tiến hành ly tâm 13.000 vòng/phút trong 15 phút. Sau khi ly tâm,II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU phần dịch trong phía trên (900 µl) được1. Vật liệu nghiên cứu ch ...