Nghiên cứu xác định đa hình C677T trên gene MTHFR bằng kỹ thuật PCR-RFLP ở bệnh nhân có tinh dịch đồ bất thường

Đa hình C677T trên gene MTHFR là một yếu tố nguy cơ của nhiều bệnh lý khác nhau, bao gồm vô sinh nam. Mục tiêu: Đề tài được thực hiện nhằm các mục tiêu: Hoàn thiện kỹ thuật PCR-RFLP với cặp mồi tự thiết kế để xác định đa hình C677T trên gene MTHFR; Xác định tỷ lệ các đa hình tại C677T của gene MTHFR trên nhóm người tình nguyện và nhóm bệnh nhân có bất thường tinh dịch đồ.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu xác định đa hình C677T trên gene MTHFR bằng kỹ thuật PCR-RFLP ở bệnh nhân có tinh dịch đồ bất thường NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐA HÌNH C677T TRÊN GENE MTHFR BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP Ở BỆNH NHÂN CÓ TINH DỊCH ĐỒ BẤT THƯỜNG Hà Thị Minh Thi1, Nguyễn Thị Nguyệt Minh2 (1)Bộ môn Di truyền Y học, Trường Đại học Y Dược Huế (2)Sinh viên Y năm 5, Trường Đại học Y Dược HuếTóm tắt:Đặt vấn đề: Đa hình C677T trên gene MTHFR là một yếu tố nguy cơ của nhiều bệnh lý khácnhau, bao gồm vô sinh nam. Mục tiêu: Đề tài được thực hiện nhằm các mục tiêu: 1. Hoàn thiệnkỹ thuật PCR-RFLP với cặp mồi tự thiết kế để xác định đa hình C677T trên gene MTHFR.2. Xác định tỷ lệ các đa hình tại C677T của gene MTHFR trên nhóm người tình nguyện vànhóm bệnh nhân có bất thường tinh dịch đồ. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Táchchiết DNA từ máu ngoại vi của 60 người tình nguyện và 30 người có tinh dịch đồ bất thường.Thiết kế cặp mồi bằng phần mềm FastPCR và hoàn thiện kỹ thuật PCR-RFLP. Kiểm chứng kếtquả bằng phương pháp xác định trình tự. Xác định tỷ lệ các đa hình C677T. Kết quả: Đã thiếtkế được cặp mồi cho phép khuếch đại đoạn gene MTHFR chứa vị trí đa hình 677 và luôn có mộtvị trí cắt bắt buộc (làm chứng nội). Tỷ lệ 677CC là 71,67%; 677CT là 25%; 677TT là 3,33%trong nhóm tình nguyện. Tỷ lệ các đa hình trong nhóm bệnh nhân có tinh dịch đồ bất thường là677CC chiếm 66,67%; 677CT chiếm 30% và 677TT chiếm 3,33%. Các tỷ lệ này trong nhómvô tinh lần lượt là 53,34%; 40% và 6,66%. Trong nhóm thiểu năng tinh trùng lần lượt là 80%;20% và 0%. Kết luận: Đã hoàn thiện thành công kỹ thuật PCR-RFLP để xác định đa hìnhC677T trên gene MTHFR. Xác định được tỷ lệ các đa hình C677T ở nhóm người tình nguyệnvà các nhóm bất thường tinh dịch đồ.Abstract: STUDY ON IDENTIFYING THE C677T POLYMORPHISM OF MTHFR GENE BY PCR-RFLP TECHNIQUE IN PATIENTS WITH ABNORMAL SEMEN ANALYSIS Ha Thi Minh Thi, Nguyen Thi Nguyet Minh Department of Human Genetics, Hue University of Medicine and Pharmacy The fifth student, Hue University of Medicine and PharmacyBackground: The C677T polymorphism of MTHFR gene is a risk factor of many diseases,including male infertility. This study is aimed at: 1. Improving a PCR-RFLP process with theown designed primers to identify the C677T polymorphism of MTHFR gene. 2. Evaluating theprevalence of the C677T polymorphism of MTHFR gene in the volunteer group and the malewith abnormal semen analysis. Materials and Method: DNA samples was extracted fromperipheral blood of 60 volunteers and 30 patients with abnormal semen analysis. Designingprimers by using FastPCR software, then improving PCR-RFLP technique. Confirming theresults of polymorphism by DNA sequencing technique. Evaluating the prevalence of the66 DOI: 10.34071/jmp.2012.1.9 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Số 7C677T polymorphism of MTHFR gene. Results: We designed successfully primers to amplifyfragment of MTHFR gene including C677T polymorphism and an obligatory restrictionsite of HinfI (as internal control). The MTHFR genotype frequencies in the volunteer groupwere: 71.67% (677CC); 25% (677CT); and 3.33% (677TT). Genotype frequencies in patientswith abnormal semen analysis were 66.67%; 30% and 3.33%; in group of azoospermia were53.34%; 40% and 6.66%; in group of oligospermia were 80%; 20% and 0%. Conclusion:We standardized successfully PCR-RFLP technique to identifying C677T polymorphism ofMTHFR gene.We evaluated the prevalence of the C677T polymorphism of MTHFR gene in thevolunteer group and the male with abnormal semen analysis.1. ĐẶT VẤN ĐỀ Đa hình C677T trên gene MTHFR làm Methylenetetrahydrofolate reductase thay đổi một acid amin ở vị trí 226 trong(MTHFR) là một enzyme quan trọng trong quá chuỗi polypeptide tương ứng, từ alanine trởtrình chuyển hóa folate - thành phần thiết yếu cho thành valine. Sự thay đổi này làm enzymenhiều chức năng của tế bào. Enzyme này chuyển methylenetetrahydrofolate reductase bị giảm5,10-methylenetetrahydrofolate thành dạng có hoạt tính, khoảng 70-80% ở người đồnghoạt tính sinh học là 5-methyltetrahydrofolate. hợp tử 677TT và 30-35% ở người dị hợp tửQuá trình này chuyển homocysteine thành 677CT, dẫn đến rối loạn sự phân phối folatemethionine, sau đó methionine được sử dụng trong tế bào [4]. Folate có chức năng chốngđể tổng hợp protein cũng như các hợp chất oxy hóa, do đó nồng độ folate thấp trong tinhquan trọng cho cơ thể [9]. dịch làm tăng nguy cơ hủy hoại DN ...