Nghiên cứu xác định nấm Aspergillus sinh độc tố aflatoxin trên lạc bằng phản ứng pcr đặc hiệu

Aflatoxins là chất chuyển hóa chất gây ung thư được sản xuất thành viên byseveral của Aspergillusgroup, chẳng hạn như Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus nomius.Number các phương pháp đã được phát triển để phát hiện độc tố aflatoxin trong ngũ cốc và thực phẩm, bao gồm cả phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), sắc ký overpressured, phản ứng chuỗi polymerase (PCR), xét nghiệm miễn dịch enzyme (ELISA) .... ít nhất, hơn 20 gen đã được xác định để được tham gia vào con đường sinh tổng hợp Aflatoxin. Trong đó, các...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu xác định nấm Aspergillus sinh độc tố aflatoxin trên lạc bằng phản ứng pcr đặc hiệu NGHIÊN C U XÁC Đ NH N M Aspergillus SINH Đ C T AFLATOXIN TRÊN L C B NG PH N NG PCR Đ C HI U Tr n Tu n Tú, àm Quang Hi u, Hoàng Th Ngát, Lê Huy Hàm và Ph m Xuân H i Summary Identification of Aspergillus flavus induced Aflatoxin in peanut in the orth of Vietnam using PCR methodAflatoxins are carcinogenic metabolites produced by several members of Aspergillus group, suchas Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus nomius.Number of methodologies havebeen developed for detection of aflatoxin in grain and food, including thin-layer chromatography(TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC), overpressured chromatography,polymerase chain reaction (PCR), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)....At least, morethan 20 genes have been determined to be involved in Aflatoxin biosynthesis pathway. In which,genes ver-1, omt-1 and apa-2 play an important role in the pathway. In this study, we use ver as atarget gene to detect peanut contaminated aflatoxin in the North of Vietnam by employing PCRapproach. Peanut samples on the field, household and market from different area have beencollected for isolating Aspergillus flavus induced Aflatoxin strains using from a separate hypha. Aprimer pair complementing the coding portion of ver gene was generated. DNA extracted fromAspergillus flavus, Aspergillus niger strains from Nghean, Haiduong and Hanoi provinces was usedas PCR template. Positive results as designed PCR products were observed only with all DNAtemplates of Aspergillus flavus from different sources, while no PCR products were observed withDNA templates of Aspergillus niger. The results is suggesting a posibility to use PCR as selectivemethod for early, accurate detection of aflatoxin contaminated in peanut as well as in grains andfoods.Keywords: Aflatoxin, Aspergillus flavus, peanut, PCR, identification. tương.... Các lo i h t có d u ( c bi t nhưI. TV N l c) r t thích h p cho s phát tri n c a n m N m sinh c t là m t trong nh ng tác Aspergillus spp. cũng như s hình thành cnhân gây b nh ph bi n làm gi m ch t lư ng t Aflatoxin.và giá tr s n phNm nông nghi p do sinh ra Xu t phát t th c t trên, ã có nhi ucác lo i c t gây h i cho s c kho con phương pháp ư c nghiên c u và áp d ngngư i và v t nuôi. Ph bi n nh t trong nhóm trên th gi i nh m phát hi n s m ngu nn m sinh c t là n m b nh Aspergillus spp. n m b nh, i u này có ý nghĩa quan tr ng(A. flavus; A. parasiticus; A. fumigatus...) có trong vi c h n ch tác h i n m b nh trênkh năng sinh c t gây ung thư Aflatoxin. nông s n. Phương pháp PCR ã ư c sCác ch ng n m này có ph ho t ng r t d ng phát hi n các lo i n m và vi khuNnr ng vì v y có kh năng lây nhi m trên nhi u gây b nh và sinh c t trên nông s n, th clo i nông s n như ngô, l c, bông, u phNm và các lo i th c ăn gia súc, do ti nl i, d áp d ng, có kh năng phát hi n s m s i n m m c trên l c và v h t l c, xácm m b nh k c khi chúng chưa sinh c nh các i m m c n m thích h p ti nt . Có ít nh t 20 gen tham gia vào con hành c y chuy n và phân l p. ư ng t ng h p aflatoxin, m t s gen quan 2.2. Phương pháp phân l p n m: Str ng trong s ó ã xác nh ư c tr t t d ng phương pháp tách s i n m ơnnucleotid và ch c năng như apa, omt, ver, làm thu n các isolate. Trên ĩa môi trư ngnor... Trong nghiên c u này chúng tôi s c, ti n hành c y chuy n b ng cách l yd ng gen ver - mã hoá cho enzyme chuy n s i n m t i các i m ngoài rìa c a khuNnversicolorin thành sterigmatocystin (ti n l c c y chuy n sang ĩa môi trư ngch t u tiên trong nhánh sinh t ng h p m i. M i khuNn l c trên ĩa môi trư ngAflatoxin B1- ch t c nh t và ph bi n ch n t 3 n 5 i m c y chuy n theotrong nhóm Aflatoxin) làm gen ích nguyên t c ng u nhiên. Ti n hành phân l pbư c u xác nh s có m t c a n m b nh nh ng m u n m Aspergillus có c i mAspergillus sinh c t trên các m u l c thu hình thái i n hình trên c 2 lo i môith p m t s t nh mi n B c Vi t N am. trư ng PDA c (120 ml d ch chi t khoai tây, 12 g dextrose, 10 g agar cho 1L môiII. V T LI U VÀ PHƯƠN G PHÁP trư ng - là môi trư ng giàu dinh dư ng) vàN GHIÊN C U môi trư ng Czapek c (là môi trư ng1. V t li u nghiên c u dinh dư ng trung bình) cho n khi t t i Các gi ng l c thu th p trong nhà dân, ng u v màu s c và t c pháttrên ng ru ng và trên th trư ng các tri n c a khuNn l c. D a vào các c i mt nh N gh An, H i Dương và Hà N i ư c nh n d ng m u s c khuNn l c, hình d ngs d ng phân l p ngu n n m b nh. C p s i n m, v t loang l i trên môi trư ngm i c hi u cho gen ver, các hóa ch t s quan sát trên ĩa petri và k t h p v i hìnhd ng trong sinh h c phân t ph c v vi c d ng bào t , cu ng sinh bào t , th bình...tách chi t ADN t ng s s i n m và các quan sát trên kính hi n vi chúng tôi ti pnguyên li u cho ph n ng PCR ư c mua t c làm thu n các isolate b ng vi c ch nc a hãng Sigma, Fermentas... l c và c y chuy n các m u n m trên môi trư ng c. ...