Nghiên cứu xây dựng phương pháp phát hiện ký sinh trùng trichinella bằng kỹ thuật tiêu cơ

Nghiên cứu này nhằm mục đích xây dựng và đánh giá quy trình phát hiện trichinella trong thịt. Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật tiêu cơ bằng pepsin và HCl. Mời các bạn cùng tham khảo chi tiết bài viết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu xây dựng phương pháp phát hiện ký sinh trùng trichinella bằng kỹ thuật tiêu cơ Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN KÝ SINH TRÙNG TRICHINELLA BẰNG KỸ THUẬT TIÊU CƠ Nguyễn Tiến Dũng*, Dương Thị Hân* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu này nhằm mục đích xây dựng và đánh giá quy trình phát hiện Trichinella trong thịt. Phương pháp nghiên cứu: Sử dụng kỹ thuật tiêu cơ bằng pepsin và HCl. Kết quả: Kết quả nghiên cứu cho thấy các yếu tố pH, nhiệt độ, thời gian và nồng độ pepsin trong dịch thủy phân có ảnh hưởng lớn đến hiệu suất thủy phân và khả năng phát hiện Trichinella. Phương pháp phát hiện Trichinella bằng kỹ thuật tiêu cơ đã được xây dựng thành công với các đặc điểm kỹ thuật như sau: tỉ lệ giữa khối lượng mẫu và dịch thủy phân là 1:300; pH của dịch thủy phân là 1,5; nồng độ pepsin trong dịch thủy phân là 6 FIP-U/ml; nhiệt độ cho giai đoạn thủy phân là 35oC, thời gian thủy phân khoảng 25 - 30 phút. Kết quả đánh giá hiệu lực cho thấy phương pháp được xây dựng có giới hạn phát hiện là 2 ấu trùng Trichinella/50g mẫu thịt, độ nhạy là 100%, độ đặc hiệu là 100%, độ chính xác là 94,4%, tỉ lệ dương tính giả là 0%, tỉ lệ âm tính giả là 9,1%. Kết luận: Phương pháp đã xây dựng có các thông số kỹ thuật tương đương với phương pháp của Trung tâm Ký sinh trùng và Bệnh truyền nhiễm qua đường thực phẩm thuộc Cơ quan Thanh tra thực phẩm Canada với độ tin cậy 95%. Phương pháp này có thể áp dụng tại các phòng kiểm nghiệm an toàn thực phẩm. Từ khóa: Ký sinh trùng, pepsin, thịt heo, thủy phân, Trichinella. ABSTRACT RESEARCH METHODS OF DETECTION PARASITES TRICHINELLAWITHDIGESTION OF MEAT Nguyen Tien Dung, Duong Thi Han * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 - Supplement of No 1 - 2013: 145 - 150 Objective: The objective of this study was developing the method for the detection of Trichinella in pork Methods: Digestion of meat by enzyme pepsin and hydrochloric acid. Results: The study results show that several factors affect to analysis process such as pH, temperature, time, digestive enzyme concentration affect to analysis process. The method for the detection of Trichinella in pork by the digestion principle has been set up successfully. The new method have the specifications as follows: The rate of sample volume/hydrolyte volume is 1:300; pH of hydrolyte is 1.5; pepsin concentration in hydrolyte is 6 FIPU/ml; temperature for hydrolysis stage is in 35°C, hydrolysis time is in 25 - 30 minutes. The method validation results of the set up method show that the limit of detection are 2 Trichinella larvae/50g, sensitivity is 100%, specificity is 100%, accuracy is 94.1%, false positive rate is 0% and false negative rate is 9.1%. Conclusions: The effectiveness of set up method for detection of Trichinella in pork is equivalent to the reference method from Centre for Food-borne and Animal Parasitology of Canadian Food Inspection Agency. The similarity of the reference method and the set up method is 95% of confidence. This method can be applied at food laboratory to detect Trichinella in meat. * Trung tâm Chất lượng Nông lâm thủy sản vùng 4 Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Tiến Dũng, ĐT: 0918044558, Email: dungnt.nafi4@mard.gov.vn Chuyên Đề Ký Sinh Trùng 145 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 1 * 2013 Keywords: Parasite, pepsine, pork, digestion, Trichinella. ĐẶT VẤN ĐỀ Trichinella là ký sinh trùng gây bệnh cho người và động vật. Bệnh Trichinellosis do Trichinella gây ra còn được gọi là bệnh sán heo đã được ghi nhận ở các động vật nuôi nhưng chúng chiếm tỉ lệ lớn trên heo. Tỉ lệ mắc bệnh này trên toàn thế giới là gần 10.000 người/năm, tỉ lệ tử vong khoảng 0,2%. Theo thống kê của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) thịt heo là nguồn chủ yếu lây truyền bệnh Trichinellosis cho người(3). Tại các nước Châu Âu, Mỹ, Canada và một số nước khác yêu cầu phải kiểm tra Trichinella trong thịt trước khi đưa ra thị trường tiêu thụ hoặc xuất khẩu(2). Tại Việt Nam, các nghiên cứu về Trichinella trên thực phẩm còn rất ít, chưa xây dựng được phương pháp đủ độ nhạy và độ tin cậy để phân tích ký sinh trùng này trong thực phẩm. Vì vậy việc nghiên cứu xây dựng qui trình phát hiện Trichinella trong thực phẩm là cần thiết. Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu này nhằm xác định các yêu cầu kỹ thuật để xây dựng phương pháp phát hiện ký sinh trùng Trichinella trong thịt bằng kỹ thuật tiêu cơ kết hợp khuấy từ. Đánh giá hiệu lực qui trình đã xây dựng để xác định các thông số kỹ thuật của phương pháp như: giới hạn phát hiện, độ chính xác, độ đặc hiệu, độ nhạy, tỉ lệ âm tính giả, tỉ lệ dương tính giả, đồng thời xác định phạm vi và điều kiện áp dụng của phương pháp. ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Dòng ký sinh trùng sử dụng trong nghiên cứu: Dòng Trichinella spiralis được cung cấp bởi Trung tâm Ký sinh trùng động vật và Bệnh truyền nhiễm qua đường thực phẩm (Centre for Food-borne and Animal Parasit ...