Nghiên cứu xây dựng thư viện chứng dương cho xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán bệnh alpha thalassemia

Bài viết Nghiên cứu xây dựng thư viện chứng dương cho xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán bệnh alpha thalassemia được nghiên cứu nhằm tạo ra thư viện gồm các mẫu đối chứng dương cho 6 loại đột biến trên gen alphaglobin bằng công nghệ DNA tái tổ hợp.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu xây dựng thư viện chứng dương cho xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán bệnh alpha thalassemia C«ng tr×nh nghiªn cøu KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG THƯ VIỆN CHỨNG DƯƠNG CHO XÉT NGHIỆM SINH HỌC PHÂN TỬ CHẨN ĐOÁN BỆNH ALPHA THALASSEMIA Bạch Thị Như Quỳnh1, Nguyễn Hải Bằng1, Hà Thị Thu2 Nguyễn Văn Thảnh, Vũ Thị Thu Trang1, Dương Quốc Chính3 TÓM TẮT 2 trong xét nghiệm chẩn đoán bệnh alpha- Mục tiêu: tạo thư viện chứng dương cho 6 thalassemia. đột biến trên gen alpha-globin. Đối tượng và Từ khóa: Alpha-thalassemia, Thư viện chứng phương pháp: từ 200 bệnh nhân được chẩn đoán dương, Công nghệ DNA tái tổ hợp. mang gen bệnh Thalassemia tiến hành sàng lọc nhằm phát hiện các đột biến SEA, THAI, α-4.2, SUMMARY α-3.7, HbCs và C.2delT bằng kỹ thuật Multiplex- CREATING THE POSITIVE CONTROL PCR. Các gen đột biến được tạo dòng trong tế LIBRARY FOR MOLECULAR bào E. Coli với chủng DH5α, nuôi cấy tăng sinh BIOLOGY TECHNIQUES TO để tạo thư viện chứng dương. Các dòng tế bào tái DIAGNOSE OF ALPHA tổ hợp được tiến hành đánh giá ngoại kiểm tại THALASSEMIA Viện Huyết Học và Truyền máu Trung ương trên Objective: create a positive control library for quy trình phát hiện đột biến gen gây bệnh alpha 6 mutations on the alpha-globin gene. Subject thalassemia bằng kỹ thuật multiplex PCR. Kết and method: 200 patients diagnosed with quả: Từ các mẫu DNA của bệnh nhân dương tính Thalassemia genes were screened to detect với alpha-thalassemia, nghiên cứu đã tạo ra mutations SEA, THAI, α-4.2, α-3.7, HbCs and nguồn thư viện gồm các mẫu chứng dương tính C.2delT using Multiplex-PCR technique. The của 6 đột biến trên gen alpha-globin bao gồm: mutation genes were developed in E. coli cells SEA, THAI, α-4.2, α-3.7, HbCs, C.2delT. Kết with DH5α strain, cultured and proliferated to quả ngoại kiểm cho thấy nguồn chứng dương create the positive control library. Positive được tạo ra bằng con đường tái tổ hợp ổn định và controls were externally assessed at the National đặc hiệu hơn khi so sánh với đối chứng dương là Institute of Hematology and Blood Transfusion mẫu máu người mang gen bệnh. Kết luận: Các using detection protocol for gene mutations chứng dương tái tổ hợp đủ tiêu chuẩn sử dụng causing alpha thalassemia with multiplex PCR technique. Result: From the available DNA of alpha-thalassemia-positive patients, a library of 1 Trường Đại học Y Dược Hải Phòng positive controls of 6 mutations in the alpha- 2 Viện Công nghệ Sinh học - Viện Hàn lâm khoa globin gene was created, including SEA, THAI, học và công nghệ Việt Nam α-4.2, α-3.7, HbCs, C.2delT. External quality 3 Viện Huyết học và truyền máu Trung ương. assessment results showed that the positive Chịu trách nhiệm chính: Bạch Thị Như Quỳnh controls generated by recombinant pathway are Email: btnquynh@hpmu.edu.vn more stable and specific comparing with the Ngày nhận bài: 11.1.2022 positive controls derived from human blood Ngày phản biện khoa học: 19.3.2022 samples from genes carriers. Conclusion: The Ngày duyệt bài: 25.5.2022 12 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 515 - THÁNG 6 - SỐ ĐẶC BIỆT - PHẦN II - 2022 recombinant positive controls can be applied in dương tính đặc biệt là những mẫu đột biến diagnostic tests for alpha-thalassemia. hiếm do những chứng dương được sử dụng Keywords: Alpha-thalassemia, positive tại Việt Nam hiện nay đều được tách chiết từ control material, recombinant DNA technology. máu của các bệnh nhân mang đột biến gen alpha thalassemia [2]. Xuất phát từ lý do trên I. ĐẶT VẤN ĐỀ chúng tôi đã tiến hành đề tài nghiên cứu Alpha-thalassemia là một bệnh lý di nhằm tạo ra thư viện gồm các mẫu đối chứng truyền liên quan đến sự bất thường của dương cho 6 loại đột biến trên gen alpha- protein cấu trúc có chức năng vận chuyển globin bằng công nghệ DNA tái tổ hợp. oxy của hồng cầu – Hemoglobin. Nguyên nhân của bệnh là do bất thường về cấu trúc II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU và số lượng gen alpha-globin nằm trên cánh 1. Đối tượng nghiên cứu ngắn nhiễm sắc thể số 16 [4]. Tùy thuộc vào Sáu loại đột biến: SEA, THAI, α-4.2, α- số gen alpha-globin bị bất thường dẫn tới các 3.7, HbCs và C.2delT sàng lọc từ 200 bệnh kiểu hình thiếu máu từ nhẹ đến nặ ...