Phân lập, chẩn đoán bệnh bạc lá lúa bằng kỹ thuật phân tử và bảo quản nguồn bệnh cho nghiên cứu

Bài viết tiến hành thu thập. phân lập và xác định nguồn bệnh bạc lá bằng kỹ thuật PCR. Bảo quản nguồn bệnh phân lập được để làm vật liệu nghiên cứu. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm chi tiết hơn nội dung nghiên cứu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân lập, chẩn đoán bệnh bạc lá lúa bằng kỹ thuật phân tử và bảo quản nguồn bệnh cho nghiên cứuPHÂN LẬP, CHẨN ĐOÁN BỆNH BẠC LÁ LÚA BẰNG KỸ THUẬT PHÂN TỬ VÀ BẢO QUẢN NGUỒN BỆNH CHO NGHIÊN CỨU DENTIFICATION OF RICE BACTERIAL LEAF BLIGHT Xanthomonas oryzae BY PCR Đoàn Thị Thanh Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam Abstract Bacterial blight (BB) is one of the most destructive disease of rice plants in almost rice growing countries inboth temperature and tropical regions especially in Asia. This is also a major disease of rice in Viet nam. Thisdisease is multiplicate increase during the past 10 years in the Northern Vietnam in both two seasons of rice. Wecollected 0 isolates of the bacterial leaf bright of rice from various regions of Northern Vietnam. Theidentification of Xanthomonas oryzae (X.oryzae) species by PCR showed that: There are 29 isolates of X.oryzaeby using primers X R -F and X R -R2. Time preservation of X.oryzae in liquid glycerol last one year, in skimmilk medium over one year and in water only two months. Keywords: Xanthomonas oryzae, PCR. Bắc Việt Nam. . ĐẶT VẤN ĐỀ - Các môi trường để phân lập và bảo quản vi Bệnh bạc lá nguyên nhân do vi khuẩn khuẩn và hoá chất cần thiết để chạy PCR xácXanthomonas oryzae pv oryzae gây nên, là một định nòi vi khuẩn bạc lá lúa.trong những bệnh hại nguy hiểm đối với cây lúa 2.2. Phương pháp nghiên cứutrong cả hai vụ: vụ xuân và vụ mùa ở nước ta. - Phân lập nòi vi khuẩn bạc lá lúa trên môiNhững năm gần đây bệnh gây thiệt hại rất nặng, trường Wakimoto, 1995.đặc biệt là trên các giống lúa lai và những giống - Phương pháp lây nhiễm theo GS.TS.S.Tauralúa thuần nhập nội từ Trung quốc. Do vậy cần (2000).xác định chính xác nguồn bệnh làm vật liệu cho - Phương pháp PCR để xác định nòi vi khuẩncông tác chọn tạo giống là cần thiết. Do vậy, theo GS.TS.S.Taura (2000).chúng tôi đã tiến hành thu thập. phân lập và xác - Phương pháp bảo quản của Wakimotođịnh nguồn bệnh bạc lá bằng kỹ thuật PCR. Bảo (1995) vàquản nguồn bệnh phân lập được để làm vật liệu nguy Hwang (1998).nghiên cứu. . PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu nghiên cứu .1. Thu thập nguồn bệnh - Vật liệu nghiên cứu bao gồm 0 nguồn Chúng tôi đã thu thập nguồn bệnh từ các vùngbệnh được thu thập từ các vùng trồng lúa ở miền trồng lúa ở miền Bắc Việt nam. Kết quả thu đượcở bảng 1. Bảng1. Danh sách các isolates đã thu thập STT Nơi thu thập STT Nơi thu thập 1 Dòng vi khuẩn chuẩn từ 17 VAS RR , Hà Nội - 6 2 An Khánh, Hoài Đức, Hà Tây 18 Sơn Tây, Hà Tây An Khánh, Hoài Đức, Hà Tây 19 TT xã, Sơn Tây, Hà Tây 4 VAS 20 Sơn Tây, Hà Tây , Hà Tây 5 Hoài Đức, Hà Tây 21 Văn Giang, Hưng ên -1 6 Đồng Hỷ, Thái Nguyên 22 Văn Giang, Hưng ên -2 7 Đồng Hỷ, Thái Nguyên 2 Trại TN Lai Cách, Hưng ên -1 8 ĐH Nông Lâm, Thái Nguyên 24 Trại TN Lai Cách, Hưng ên -2 9 Thanh Trì, Hà Nội 25 Trường NN, Việt ên, Bắc Giang 10 VAS 26 Đông Hưng, Thái Bình , Hà nội -1 11 VAS 27 Hưng Hà, Thái Bình , Hà nội -2 12 VAS 28 Thái Thuỵ, Thái Bình , Hà nội - 1 Quế Võ, Bắc Ninh -1 29 Gia Lâm, Hà Nội 14 Quế Võ, Bắc Ninh -2 0 Trâu Quì, Hà Nội 15 VAS 1 Văn Giang, Hưng ên , Hà nội -4 16 VAS , Hà nội -5 .2. Lây nguồn bệnh để xác định isolates là bộ lá có trên cây đó. Kết quả ở hình 1.bệnh Xanthomnas oryzae - Trước xác định bệnh tiến hành lây thử lêndòng mẫn cảm làR24 để thử độc tính của vi khuẩn sau bảo quản. - Tạo dung dịch lây nhiễm: Sau 48 giờ vikhuẩn nuôi cấy trong môi trường Wakimoto mọc.Khi đó ta lấy một vòng vi khuẩn hoà với 10 mlnước tạo dung dịch có nồng độ vi khuẩn từ 108-109 / 1 ml nước. Đem dung dịch đó đi lây nhiễm. - Lây nhiễm mỗi chủng 1 cây, mỗi cây cắt toàn agarose 2%.: Sau khi đã pha trộn đầy đủ, ủ chúng ở 70C trong Water bath hoặc ven trong vòng 6 tiếng, hoặc có thể ủ qua đêm. Tiếp đó chạy điện di sản phẩm gen cắt bằng agarose 2%. Lúc này có thể phân biệt được các vạch. Thường điện di dòng điện có hiệu điện thế là 60V, cường độ dòng điện là 200 mA trong 0 phút. ...