Phân tích thành phần các saponin chính trong sâm việt nam nuôi cấy mô bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Đề tài nghiên cứu tiến hành phân tích thành phần các saponin chính trong Sâm Việt Nam nuôi cấy mô bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân tích thành phần các saponin chính trong sâm việt nam nuôi cấy mô bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng caoY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011Nghiên cứu Y họcPHÂN TÍCH THÀNH PHẦN CÁC SAPONIN CHÍNHTRONG SÂM VIỆT NAM NUÔI CẤY MÔBẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAOHoàng Hải Anh*, Nguyễn Minh Cang*, Nguyễn Minh Đức*TÓM TẮTMục tiêu: Phân tích thành phần các saponin chính trong Sâm Việt Nam nuôi cấy mô bằng phương phápSắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).Phương pháp: Sử dụng phương pháp HPLC với cột Supelcosil RP-18 và hỗn hợp acetonitril – nước làmpha động, phân tách và định lượng các saponin chính có trong mẫu Sâm Việt Nam nuôi cấy mô, so sánh với SâmViệt Nam tự nhiên.Kết quả: Qua phân tích, mẫu Sâm Việt Nam nuôi cấy mô có chứa các saponin chính trong thành phầnsaponin tương tự như Sâm Việt Nam tự nhiên nhưng với hàm lượng thấp hơn.Kết luận: Mẫu Sâm Việt Nam nuôi cấy mô khảo sát chứa các saponin chủ yếu có trong Sâm Việt Nam, cótriển vọng nghiên cứu hoàn chỉnh để cung cấp nguồn sâm bổ sung.Từ khóa: Sâm Việt Nam, Sâm Việt Nam nuôi cấy mô, saponin, sắc ký lỏng hiệu năng cao.ABSTRACTHPLC ANALYSIS OF MAJOR SAPONINS IN BIO-CULTURED VIETNAMESE GINSENGHoang Hai Anh, Nguyen Minh Cang, Nguyen Minh Duc* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 579 - 584Objectives: to separate and quantitatively determine major saponins in bio-cultured products of Panaxvietnamensis by HPLC.Methods: A reverse phase HPLC method using a Supelcosil RP-18 column and acetonitril–water mixtureas mobile phase was used to separate and quantitatively determine major saponins in cultured VietnameseGinseng in comparison with the natural one.Results: The major saponins in Panax vietnamensis are also present in bio-cultured products, but in lowercontents.Conclusion: The bio-cultured Vietnamese Ginseng contains most of the major saponins found in the naturalone. It should therefore be a potential source of Vietnamese Ginseng in future.Keywords: Panax vietnamensis, bio-cultured Vietnamese Ginseng, saponin, HPLC.trong những dược liệu độc đáo, quý giá củaĐẶT VẤN ĐỀnước ta với nhiều đặc tính dược lý và tác độngSâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha ettrị liệu có thể so sánh với sâm Triều Tiên(3,4).Grushv. - Araliaceae) được phát hiện vào nămNhững năm gần đây nguồn Sâm Việt Nam1973 và được nghiên cứu một cách sâu rộng vềtự nhiên đang bị khai thác trái phép, nuôi trồngnhiều phương diện như thực vật học, trồng trọt,chưa phát triển, khiến Sâm Việt Nam đang đốihóa thực vật và dược lý học từ năm 1977. Cácmặt với nguy cơ cạn kiệt. Việc phát triểnnghiên cứu cho thấy rằng Sâm Việt Nam là một*Khoa Dược – Đại Học Y Dược TPHCMTác giả liên lạc: GS. TS. Nguyễn Minh ĐứcChuyên Đề Dược KhoaĐT: 0908989865Email: ducng@hcm.vn.vnn579Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011Nghiên cứu Y họcphương pháp nuôi cấy Sâm Việt Nam bằngcông nghệ sinh học sẽ đóng góp nguồn Sâm ViệtNam cho trồng trọt và sử dụng làm thuốc. Tuynhiên, chất lượng của sâm nuôi cấy mô còn làmột dấu hỏi.Mục tiêu của đề tài này là áp dụng phươngpháp sắc ký lỏng hiệu năng cao(1,2) để phân tíchthành phần các saponin chính có trong Sâm ViệtNam nuôi cấy mô so sánh với Sâm Việt Namthiên nhiên.NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPNguyên liệuMẫuBộ phận dùngSâm ViệtRễ củNam (SVN)Sâm Việt Căn hành: 60%Nam nuôi Tiền cây con: 20%cấy mô Plbs : 20%1(SVN NCM)Độ ẩmNguồn cungcấp6,56% Sở Y tế Kontum10,88% Công ty TNHHQuốc tế HoàngGia (*)(*): 30/70/9, đường D2, phường 25, quận Bình Thạnh, Tp.HCM.Phương pháp nghiên cứuHóa chất và dụng cụ máy mócChất chuẩn: các saponin chuẩn, gồm: G-Rb1,G-Rg1, G-Rd, G-Re, N-R1, M-R2 do Ban NghiênCứu Khoa Học – Khoa Dược cung cấp, có độtinh khiết > 97%.580Resin pha đảo Diaion HP-20 (styren divinylcopolymer resin) của Mitsubishi Chemicals Co.(Nhật Bản).Máy HPLC LC-10 AD – Shimadzu, NhậtBản, cột Supelcosil RP-C18 (150 x 4,6 mm, 5,0µm), kèm theo cột bảo vệ Supelguard (20 x 4,6mm), detector photodiode array (SPD-M10A VP– Shimadzu, Nhật Bản) đặt ở bước sóng 203 nmhoặc detector RI, tốc độ dòng: 1,0 ml/phút.Định tính sơ bộ bằng sắc ký lớp mỏngChuẩn bị dung dịch chuẩn và dung dịchthử: hòa tan các chất chuẩn hoặc cắn saponinvào methanol.Điều kiện sắc kýBản mỏng tráng sẵn silica gel F254 (Merck).Hệ dung môi: CHCl3-MeOH-H2O (65: 35:10,lớp dưới).Thuốc thử hiện màu: H2SO4 20%/EtOH 50%,sấy ở 105oC đến khi hiện màu.Xây dựng đường chuẩn từ các saponin chuẩnXây dựng đường chuẩn biểu diễn sự tươngquan nồng độ chất chuẩn với diện tích đỉnhbằng cách bơm vào máy HPLC các lượng ướcphân của từng dung dịch chuẩn với nồng độthích hợp [saponin (mg/ml)]: G-Rb1 (1,85), G-Rg1(1,65), G-Rd (1,0), G-Re (0,7), N-R1 (1,5), M-R2(3,1).Chuyên Đề Dược KhoaY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011Nghiên cứu Y họcQuy trình phân tích bằng HPLCMẫu dược liệu- Sấy ở nhiệt độ 60 ± 5oC trong ...