Phát hiện đột biến gen KRAS trong ung thư đại trực tràng bằng kỹ thuật COLD‐PCR và giải trình tự DNA

Nghiên cứu này được thực hiện nhằm mô tả đột biến trên codon 12 và 13 của gen KRAS, giúp quyết định chỉ định kháng thể đơn dòng cho bệnh nhân. Nghiên cứu thực hiện từ tháng 01/2011 đến tháng 05/2013, 173 bệnh nhân ung thư đại trực tràng được khảo sát đột biến codon 12 và 13 của gen KRAS tại Trung tâm Y Sinh học Phân tử - Đại học Y Dược TPHCM.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện đột biến gen KRAS trong ung thư đại trực tràng bằng kỹ thuật COLD‐PCR và giải trình tự DNANghiêncứuYhọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập17*PhụbảncủaSố3*2013PHÁTHIỆNĐỘTBIẾNGENKRASTRONGUNGTHƯĐẠITRỰCTRÀNGBẰNGKỸTHUẬTCOLD‐PCRVÀGIẢITRÌNHTỰDNAHoàngAnhVũ*,HứaThịNgọcHà**TÓMTẮTGiới thiệu: Tăngbiểuhiệncủathụthểyếutốtăngtrưởngbiểumôthườnggặptrongungthưđạitrựctràng(UTĐTT)vàlàđíchđiềutrịcủakhángthểđơndòng.Tuynhiên,sựkhángthuốcxảyrakhicóđộtbiếngenKRAStrongtếbàoungthư.Nghiêncứunàyđượcthựchiệnnhằmmôtảđộtbiếntrêncodon12và13củagenKRAS,giúpquyếtđịnhchỉđịnhkhángthểđơndòngchobệnhnhân.Đốitượngvàphươngphápnghiêncứu:Từtháng01/2011đếntháng05/2013,173bệnhnhânUTĐTTđượckhảosátđộtbiếncodon12và13củagenKRAStạiTrungtâmYSinhhọcPhântử–ĐạihọcYDượcTPHCM. Chúng tôi sử dụng kỹ thuật COLD‐PCR (co‐amplification at lower denaturation temperaturepolymerasechainreaction)đểkhuếchđạiexon2củagenKRAStừbệnhphẩmlàmôvùinến.Sauđó,độtbiếncủagenKRASđượcxácđịnhbằngkỹthuậtgiảitrìnhtựchuỗiDNA.Kếtquả:62trườnghợpcóđộtbiếncủagenKRAS(35,8%),trongđó4trườnghợpmangđộtbiếnởcảhaicodon 12 và 13. Có tất cả 7 dạng đột biến được phát hiện, bao gồm 5 dạng đột biến ở codon 12 (Gly12Asp,Gly12Val,Gly12Ser,Gly12AlavàGly12Cys)và2dạngđộtbiếnởcodon13(Gly13AspvàGly13Ser).Kếtluận:Độtbiếncodon12và13củagenKRASthườnggặptrênbệnhnhânViệtNambịUTĐTT.KếthợpkỹthuậtCOLD‐PCRvàgiảitrìnhtựchuỗiDNAphùhợpchokhảosátcácđộtbiếnnàytừbệnhphẩmgiảiphẫubệnh.Từkhóa:ungthưđạitrựctràng,độtbiếngenKRAS,giảitrìnhtựchuỗiDNA,COLD‐PCRABSTRACTDETECTIONOFKRASMUTATIONSINCOLORACTALCANCERUSINGCOLD‐PCRANDDNASEQUENCINGHoangAnhVu,HuaThiNgocHa*YHocTP.HoChiMinh*Vol.17‐SupplementofNo3‐2013:51‐55Background: Commonly over‐expressed in colorectal cancer, EGFR is an ideal target for monoclonalantibody therapy. However, drug‐resistance was observed in patients whose tumor cells harbored KRASmutations.WeconductthisstudytodescribeKRASmutationsatcodons12and13forselectingpatientssuitableformonoclonalantibodyindication.Materials and methods: From January 2011 to May 2013, 173 patients with colorectal cancer wereanalyzedforKRASmutationsatCenterforMolecularBiomedicine–UniversityofMedicineandPharmacy,HoChiMinhCity.COLD‐PCR(co‐amplificationatlowerdenaturationtemperaturepolymerasechainreaction)wasusedtoamplifyKRASexon2fromparaffin‐embeddedtissuesamples.MutationswereidentifiedbydirectDNAsequencing.Results:KRASmutationsweredetectedin62patients (35.8%) including 4 patients who carried doublemutations at both codons 12 and 13. In total, 7 types of mutations were found, of which 5 were at codon 12*BộmônGiảiPhẫuBệnh,ĐạihọcYDượcTPHCM**TrungtâmYsinhhọcPhântử,ĐạihọcYDượcTPHCMTácgiảliênlạc:TS.HoàngAnhVũ ĐT:01222993537 Email:hoangvuxinh@yahoo.com50ChuyênĐềGiảiPhẫuBệnhYHọcTP.HồChíMinh*Tập17*PhụbảncủaSố3*2013NghiêncứuYhọc(Gly12Asp,Gly12Val,Gly12Ser,Gly12AlaandGly12Cys)and2atcodon13(Gly13AspandGly13Ser).Conclusion:HighfrequencyofKRASmutationswerefoundinVietnamesepatientswithcolorectalcancer.COLD‐PCR in combination with direct DNA sequencing is suitable for detecting KRAS mutations frompathologicalsamples.Keywords:colorectalcancer,KRASgenemutation,DNAsequencing,COLD‐PCRchất truyền tin hạ nguồn của EGFR, KRAS cóĐẶTVẤNĐỀvai trò quan trọng trong việc khởi phát và tiếnRốiloạncácthụthểtyrosinekinase,trongđótriển của một số ung thư như carcinôm tuyếncó thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR:củađạitràng,phổivàtụy.Khiđộtbiếnxảyrasẽepidermal growth factor receptor), thường gặplàm mất hoạt tính ATPase và giữ phân tửtrong ung thư ở người, trở thành những đíchproteinKRASởtrạngtháigắnATPliêntục,dẫnnhắmphântửhiệuquảtrongđiềutrị.Hoạttínhđếnhậuquảlàcácphântửtruyềntinhạnguồntyrosine kinase của EGFR đóng vai trò quanluônhoạtđộngđể duy trì tín hiệu tăng sinh tếtrọngtrongsựđiềukhiểnsựtăngsinhvàsốngbào(13).còn của tế bào, thông qua quá trình tựTạiViệtNam,khángthểđơndòngđãđượcphosphorylhóathụthểEGFRhoặcthôngqua2chỉ định cho UTĐTT giai đoạn tiến xa. Nghiênconđườngtruyềntínhiệutrunggianhạnguồncứunàyđượctiếnhànhnhằmxácđịnhtầnsuấtlà con đường PIK3CA/AKT/mTOR vàđộtbiếntạicodon12và13củagenKRASởbệnhRAS/RAF/ ...