PHÁT HIỆN VIRUS BỆNH DỊCH TẢ HEO DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NS5B

Dịch tả heo (DTH) là một trong những bệnh gây thiệt hại kinh tế lớn nhất cho ngành chăn nuôi heo ở nước ta nói riêng và các nước trên thế giới nói chung. Năm 1997, bệnh đã quay trở lại ngay trên các nước thành viên của Liên hiệp châu Âu mà họ nghĩ bệnh đã được thanh toán triệt để trước đó (Nguyễn Tiến Dũng, 1999)
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
PHÁT HIỆN VIRUS BỆNH DỊCH TẢ HEO DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NS5B BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP PHÁT HIỆN VIRUS BỆNH DỊCH TẢ HEO DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NS5B Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khoá: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: NGÔ THỊ THU NGÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP PHÁT HIỆN VIRUS BỆNH DỊCH TẢ HEO DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NS5B Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS. TRẦN THỊ DÂN NGÔ THỊ THU NGÂN KS. VƢƠNG HỒ VŨ KS. LƢƠNG QUÝ PHƢƠNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LỜI CẢM TẠ Trước tiên con xin gởi ngàn lời cảm ơn đến ba mẹ kính yêu, ba mẹ đã luôn hysinh để dành những gì tốt đẹp nhất cho con. Con xin cảm ơn tất cả người thân đãluôn yêu thương, quan tâm và luôn cổ vũ cho con học tập.Em xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công nghệ sinh học, cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt những kiến thức quý báu cho em trong suốt 4 năm học. Ban giám đốc cùng tập thể cán bộ Trung tâm Phân Tích Thí Nghiệm trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện thuận lợi và tận tình giúp đỡ em trong suốt thời gian thực tập Em xin trân trọng biết ơn cô Trần Thị Dân và thầy Nguyễn Ngọc Tuân đã hếtlòng hướng dẫn và tạo điều kiện thuận lợi nhất cho em trong suốt quá trình thựchiện đề tài tốt nghiệp. Em xin chân thành cảm ơn anh Vương Hồ Vũ, anh Lương Quý Phương đãluôn chỉ dẫn tận tình cho em trong suốt quá trình thực tập. Em xin gởi lời cảm ơn đến: Thầy Phát, anh Út, chị Hưng, chị Trang, cùng với các anh chị ở Trung tâm đã luôn giúp đỡ, động viên em trong những lúc khó khăn. Các bạn lớp CNSH K29 thân yêu đã luôn cùng tôi chia xẻ, cổ vũ và giúp đỡ nhau trong suốt thời gian thực tập tốt nghiệp. iii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Ngô Thị Thu Ngân, Đại học Nông Lâm TP. Hồ chí Minh, tháng 9/2007,“PHÁT HIỆN VIRUS DTH DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NS5B”.Hướng dẫn khoa học: PGS. TS. Trần Thị Dân KS. Vương Hồ Vũ KS. Lương Quý Phương Đề tài được tiến hành từ ngày 01 tháng 03 năm 2007 đến ngày 01 tháng 08năm 2007 tại Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hoá sinh trường Đại học Nông Lâmthành phố Hồ Chí Minh. Gen NS5B là một trong những gen của bộ gen virus DTH ngày càng đượcsử dụng nhiều trong những nghiên cứu xác định chủng, phân loại di truyền virusDTH. Do đó, việc phát hiện virus DTH bằng phương pháp RT-PCR khuếch đạiđoạn gen NS5B nhằm ứng dụng vào công tác chuẩn đoán bệnh và có thể được sửdụng để hình thành dữ liệu di truyền đánh dấu dịch tễ virus. Kết quả đạt được như sau: 1. Xác định được quy trình tách chiết RNA thích hợp từ mẫu lách. Nồng độ LiCl 2,5 M cho tủa RNA với độ tinh sạch và chất lượng sản phẩm khuếch đại cao. 2. Đưa ra được quy trình RT-PCR một bước phát hiện gen NS5B của virus DTH với nồng độ Taq giảm từ 2,5 UI xuống 2 UI nhưng chất lượng sản phẩm khuếch đại không thay đổi. 3. Mức tỉ số OD của ELISA lớn hơn 2 cho kết quả RT-PCR dương tính cao. 4. Kết hợp được những đặc điểm bệnh tích thường gặp ở heo nhiễm bệnh DTH với nhau thông qua kết quả chẩn đoán RT-PCR dương tính. iv SUMMARY Ngô Thị Thu Ngân, Department of Biotechnology, Nong Lam University,HCMC. September, 2007. The title of thesis: “DETECTION OF CLASSICALSWINE FEVER VIRUS BASED ON NS5B GENE”. Thesis were carried out from 01/03/07 to 01/08/07 at Biochemical Analysisand Experimental Center, Nong Lam University. One of the genes of CSFV genome is NS5B gene, which is widely used forresearch on CSFV isolation and genetic typing. Therefore, CSFV detecting basedon amplification of the NS5B gene by RT-PCR method for the purpose of diseasediagnostic application and this process may be used for the generation of geneticsequence data to be used for epidemiological tracing of virus. Results obtained from the study: (1) Determined RNA extracted protocol suitable for spleen sample. At LiCl 2,5 M concentration, we collected higher pure RNA precipitate which was used in RT-PCR resulted in highly qualitative product. (2) Advanced single RT-PCR protocol to detect CSFV NS5B gene with Taq concentration decreased from 2,5 UI down 2 UI, but RT-PCR product quality was not different. (3) OD ratio of ELISA was more than 2 value resulted in high positive RT- PCR diagnostic. (4) Combined symptoms of CSFV infected pigs together through positive RT-PCR diagnostic result. v MỤC LỤCNỘI DUNG TRANGBìa .............................................................................................................................. iTrang tựa ................................................................................................................... iiLời cảm tạ................................................................................................................. iiiTóm tắt khóa luận..................................................................................................... ivSummary .... ...