Phương pháp nhuộm Gram

PhươngphápnhuộmGramcòngọilàphươngphápnhuộmphânbiệt: Vìgiúptaphânbiệtvikhuẩnthành2nhómlớn:vikhuẩnG+(grampositive)bắtmàutímvàvi
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phương pháp nhuộm Gram 1/PhươngphápnhuộmGramcòngọilàphươngphápnhuộmphânbiệt:Vìgiúptaphânbiệtvikhuẩnthành2nhómlớn:vikhuẩnG+(grampositive)bắtmàutímvàvikhuẩnG(gramnegative)bắtmàuhồng.Ngoàiranócòngiúptaquansátrõvàphânbiệtvềhìnhdáng,cấutạo,cáchphânbốcủacácloạivikhuẩnkhácnhau.2/MôtảsựkhácnhaugiữaváchtếbàoG+vàG:VáchtếbàoG+:rấtdàygồmmộtlớppeptidoglycancònđượcgọilàmureinchiếm80%90%thànhphầnváchtếbào.Peptidoglycanlàloạipolimexốp,khôngtan,khácứngvàbềnvữngbaoquanhtếbàonhưmộtmạnglưới.Cấutrúccơbảncủapeptidoglycangồm3thànhphần:Nacetylglucosamine(NAG),acidNacetylmuramic(NAM)vàtetrapeptidegồmcảloạiLvàDacidamine.Ðểtạothànhmạnglướicứng,tetrapeptidetrênmỗichuỗipeptidoglycanliênkếtchéovớitetrapeptidetrênchuỗikhác.BêntronglớppeptidoglycanlàacidteichoichợpchấtpolymercủaribitolphosphatevàglycerolphosphatemộtthànhphầnđặctrưngcủatếbàovikhuẩnG+vừaliênkếtvớipeptydoglycanvừaliênkếtvớimàngsinhchất.Phầnliênkếtvớipeptidoglycangọilàacidlipoteichoic.Hiệnnayđãbiếtđượcnhiềukiểupeptidoglycanởcácloàikhácnhaugọilàcầutrunggian.VáchtếbàoG:cócấutrúcphứctạpgồm2lớp.Trongcùnglàmộtlớppeptidoglycanmỏng,cáchmộtlớpkhônggianchuchấtvàtớilớpmàngngoài(outermembrane)làphứchợplipidpolysaccharidegồmlipoproteinvàlipopolysaccharide.Màngngoàicócấutrúcgầngiốngtếbàochấtnhưngphospholipidhầunhưchỉgặpởlớptrong,cònởlớpngoàilàlipopolysaccharidedàykhoảng810nmgồm3thànhphần:+LipidA.+Polysaccharidelõi.+KhángnguyênO.Màngngoàicòncóthêmcácprotein:+Proteincơchất:porinởvikhuẩncòngọilàproteinlỗxuyênmàngvớichứcnăngchophépmộtsốloạiphântửđiquachúngnhưdipeptide,disaccharide,cácionvôcơ…+Proteinmàngngoài:chứcnăngvậnchuyểnmộtsốphântửriêngbiệtvàđưaquamàngngoàinhư:nucleotide,vitaminB12,…+Lipoprotein:đóngvaitròliênkếtlớppeptidoglycanbêntrongvớilớpmàngngoài.3/MôtảvàgiảithíchsựbắtmàucủavikhuẩnG+vàGquatừnggiaiđoạnnhuộmmàu:Bước1:nhuộmtímtinhthể(crystalviolet)trong1phút.G+vàGđềucómàutímdomàuthấmvàolớppeptidoglycancủaG+vàmàngngoàicủaG.Bước2:thêmdungdịchLugol,để1phút.G+vàGcómàutímđậmhơndoiottạophứcchấtmàuvớitímtinhthểvàcốđịnhmàu.Bước3:Tẩybằngcồn96o(1530giây).G+cồnlàmchocáclỗpeptidoglycancolạidođóphứcchấttímtinhthểiotbịgiữlạitrongtếbào.Gdocồnlàmtanlớpmàngngoàicómàu,bảnchấtlàlipiddẫnđếnsựrửatrôiphứcchấttímtinhthểiot,dođótronggiaiđoạnnàyGsẽmấtmàu.Bước4:nhộmtiếpSafraninhayFuchsinZiehl.G+vẫngiữmàutímdokhôngbắtmàuSafraninhayFuchsinZiehlcònGbắtmàuhồng.Kếtluận:vớiphươngphápnhuộmGramnhưtrên,G+giữlạimàutím,Ggiữlạimàuhồng.4/Cáchcốđịnhtiêubản:Mụcđíchlàgiếtchếtvikhuẩnvàgiữvikhuẩncốđịnhtrênkínhkhôngbịtrôitrongquátrìnhnhuộm.Cáccáchcốđịnhtiêubản:_Bằngngọnlửa:hơnhanhtiêubảnquangọnlửađèncồn._Bằngcồn:chocồn96ovàotiêubảnvàđểcồnbayhơihết._Ðểtiêubảnkhôtựnhiên.5/Cácyếutốlàmsailệchkếtquảnhuộm:*SaixóttrongthaotácnhuộmGram,dothựchiệnchưachínhxácmộtvàigiaiđoạnsau:+Cốđịnhtiêubảnbằngngọnlửakhôngđúngsẽlàmchomàngtếbàobịbiếntínhdẫnđếnsailệchkếtquảnhuộm.+NhuộmtímtinhthểquálâuởGlàmmàuthấmvàolớppeptidoglycanbêntrong,nênkhitẩybằngcồnkhôngthểlàmsạchmàutímdẫnđếnviệcGbắtmàunhưG+.*Dothờigiannuôicấy,tuổicủavikhuẩn:nuôicấyvikhuẩnnhiềulầnlàmmấtdầntínhchấtđiểnhìnhcủachúng,vìvậykhinhuộmsẽkhôngchínhxác.*Cấutrúclớppeptidoglycancủanhiềuloàivikhuẩnkhôngphảilúcnàocũnggiốngnhauhoàntoàn,độdàycóthểsaikhácvìvậykhithựchiệnphươngphápnhuộmphảichúýđếnthờigiannhuộmhoáchấtchothíchhợpvớitừngloài.Gram (viết tắt G) là tên của nhà vi khuẩn học người Đan Mạch.Ông này đã dùng thuócnhuộm đê nhuuộm màu và phân biệt hai nhóm vi khuẩn có cấu tạo khác nhau ( Chủyếu là khác nhau ở thành ?tế bào ? :?: ) Ở vi khuẩn ?G(+) sau khi nhuộm màu soi trênkính hiển vi chúng bắt màu tím-xanh,còn G(-) bắt màu hồng. Đây là phương phápnhuộm màu phổ biến đến nay vẫn còn được sử dụng. Để nhớ ơn đến Christian Gramnên người ta đặt tên của phương pháp ?nhuộm màu này là nhuộm Gram.Thành tế bào vi khuẩn Gram âm có cấu trúc:- Peptidoglican là thành phần thứ yếu, ko chứa axit teicoic- Màng ngoài cấu trúc: protein và lớp đôi photpholipit có khảm protein đặc biệt -> bảovệ vi khuẩn chống sự thấm yếu tố hóa học bên ngoài, ngăn chặn sự xâm nhập củalizozim- Khoảng không gian chứa độc tố, các enzim -> phá hủy kháng sinh trước khi tác độnglên màng sinh chất- Cấu trúc n ...