Tạo dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên NS1 của 4 týp vi rút Dengue ở quy mô phòng thí nghiệm

Bài viết trình bày việc tạo dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên NS1 cho 4 týp của vi rút Dengue trên dòng chuột nhắt trắng BALB/c thuần chủng. Phương pháp nghiên cứu: Gây miễn dịch cho chuột BALB/c bằng kháng nguyên tái tổ hợp NS1 gộp 4 chủng; thu tế bào lympho B và dung hợp với tế bào Myeloma Sp2/0 để tạo dòng tế bào lai hybridoma có khả năng sinh kháng thể đơn dòng kháng NS1.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tạo dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên NS1 của 4 týp vi rút Dengue ở quy mô phòng thí nghiệmTҤP CHÍ Y DѬӦC HӐC QUÂN SӴ SӔ 1 - 2024 TҤO DÒNG Tӂ BÀO LAI SINH KHÁNG THӆ ĈѪN DÒNG KHÁNG KHÁNG NGUYÊN NS1 CӪA 4 TÝP VI RÚT DENGUE Ӣ QUY MÔ PHÒNG THÍ NGHIӊM Ph̩m Hùng Ti͇n1,2, Hoàng Xuân C˱ͥng3, Võ Th͓ Bích Thͯy4 Tr͓nh Th͇ S˯n3, Ĉ͟ Nh˱ Bình3* Tóm tҳt Mͭc tiêu: Tҥo dòng tӃ bào lai tiӃt kháng thӇ ÿѫn dòng kháng kháng nguyênNS1 cho 4 týp cӫa vi rút Dengue trên dòng chuӝt nhҳt trҳng BALB/c thuҫnchӫng. Ph˱˯ng pháp nghiên cͱu: Gây miӉn dӏch cho chuӝt BALB/c bҵngkháng nguyên tái tә hӧp NS1 gӝp 4 chӫng; thu tӃ bào lympho B và dung hӧp vӟitӃ bào Myeloma Sp2/0 ÿӇ tҥo dòng tӃ bào lai hybridoma có khҧ năng sinh khángthӇ ÿѫn dòng kháng NS1. Sàng lӑc dòng tӃ bào lai dѭѫng tính bҵng phҧn ӭngELISA. K͇t qu̫: Nӗng ÿӝ kháng nguyên NS1 tiêm cho chuӝt là 100 μg/mLtrong dung dӏch PBS 1x vô trùng, trӝn vӟi tá dѭӧc FCA và FIA theo thӇ tích 1:1.Dung hӧp tӃ bào lympho B và tӃ bào Myeloma Sp2/0 theo tӹ lӋ 1:5, nuôi cҩytrong môi trѭӡng HAT và HT. Tӹ lӋ tӃ bào lai phát triӇn sau 3 ngày chiӃm tӯ91,15% - 92,92%. Bҵng phҧn ӭng ELISA, lӵa chӑn ÿѭӧc 2 dòng tӃ bào lai 1A2và 2A1 có giá trӏ OD (Optical Density - mұt ÿӝ quang hӑc) cao nhҩt là 1,0324 và1,3765. K͇t lu̵n: Tҥo thành công 2 dòng tӃ bào lai 1A2 và 2A1 sinh kháng thӇÿѫn dòng ÿһc hiӋu vӟi kháng nguyên tái tә hӧp NS1 gӝp 4 chӫng vi rút Dengue. Tӯ khóa: Kháng thӇ ÿѫn dòng kháng kháng nguyên NS1; TӃ bào lai; Dunghӧp tӃ bào.1 Trѭӡng Ĉҥi hӑc Y tӃ Công cӝng2 ViӋn Sӕt rét, Ký sinh trùng và Côn trùng Trung ѭѫng3 Hӑc viӋn Quân y4 ViӋn Hàn lâm Khoa hӑc Công nghӋ ViӋt Nam*Tác giҧ liên hӋ: Ĉӛ Nhѭ Bình (nhubinh.do@vmmu.edu.vn) Ngày nhұn bài: 29/8/2023 Ngày ÿѭӧc chҩp nhұn ÿăng: 28/9/2023http://doi.org/10.56535/jmpm.v49i1.48926 TҤP CHÍ Y DѬӦC HӐC QUÂN SӴ SӔ 1 - 2024 CREATION OF HYBRIDOMA CELL LINES SECRETING MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST NS1 ANTIGEN OF FOUR DENGUE SEROTYPES Abstract Objectives: To create hybridoma cell lines that secretes monoclonal antibodiesagainst NS1 antigen for 4 types of Dengue virus in BALB/c mice. Methods:Immunize BALB/c mice with recombinant NS1 antigen with 4 strains; collect Blymphocytes and fuse with Myeloma Sp2/0 cells to create a hybridoma cell linecapable of producing monoclonal antibodies against NS1; screen the positivehybrid cell line by ELISA reaction. Results: The concentration of NS1 antigeninjected into mice was 100 μg/mL in sterile 1x PBS solution, mixed with FCAand FIA adjuvant in 1:1 volume. Fusion of B lymphocytes and Myeloma Sp2/0cells were conducted in the ratio 1:5, cultured in HAT and HT medium. Thepercentage of hybrid cells that developed after 3 days accounted for 91.15% -92.92%. By ELISA reaction, 2 hybrid cell lines 1A2 and 2A1 were selected withthe highest OD (Optical Density) values of 1.0324 and 1.3765. Conclusion:Successfully created 2 hybrid cell lines 1A2 and 2A1 producing monoclonalantibodies specific to the recombinant NS1 antigen pooling 4 strains ofDengue virus. Keywords: Monoclonal antibody against NS1 antigen; hybridoma cells;cell fusion ĈҺT VҨN Ĉӄ (IgM) hoһc ngày thӭ 14 (IgG) sau khi Sӕt xuҩt huyӃt là mӝt bӋnh do vi rút nhiӉm Dengue khiӃn cho viӋc chҭnDengue gây ra, lây truyӅn bӣi muӛi ÿoán trӣ nên chұm trӉ hѫn. Mһc dù, xétAedes aegypti, phә biӃn tҥi các vùng nghiӋm Real-time PCR có thӇ phátnhiӋt ÿӟi và cұn nhiӋt ÿӟi. ViӋc chҭn hiӋn Dengue sӟm nhѭng chӍ thӵc hiӋnÿoán nhiӉm vi rút Dengue sӟm thѭӡng ÿѭӧc ӣ nhӳng nѫi có cѫ sӣ vұt chҩt xétphҧi dӵa vào các xét nghiӋm phát hiӋn nghiӋm hiӋn ÿҥi [3].kháng nguyên NS1, kháng thӇ Dengue Kháng nguyên NS1 ÿѭӧc phát hiӋnIgM/IgG hoһc Real-time PCR ÿӇ phát nhѭ mӝt marker sinh hӑc hiӋu quҧ chohiӋn vi rút Dengue [1, 2]. Tuy nhiên, viӋc chҭn ÿoán sӟm nhiӉm vi rútkháng thӇ Dengue IgM/IgG thѭӡng Dengue do xuҩt hiӋn trong huyӃt thanhxuҩt hiӋn muӝn vào ngày thӭ 3 - 4 bӋnh nhân nhiӉm vi rút giai ÿoҥn sӟm 27TҤP CHÍ Y DѬӦC HӐC QUÂN SӴ SӔ 1 - 2024(tӯ ngày thӭ 1 - 9). Xét nghiӋm kháng * Hóa ch̭t, dͭng cͭ thí nghi͏m:nguyên Dengue huyӃt thanh có ÿӝ Hóa chҩt: Freund’s Complete Adjuvantnhҥy 92,4% và có ÿӝ ÿһc hiӋu là (FCA) (Sigma, Mӻ); Freund’s98,4% [2, 3]. Incomplete Adjuvant (FIA) (Sigma, Kháng thӇ ÿѫn dòng sҧn xuҩt bҵng Mӻ); PBS 1X vô trùng; tӃ bàocông nghӋ tӃ bào lai ÿѭӧc ӭng dөng Myeloma Sp2/0 (Sigma, Mӻ); FBS 5%rӝng rãi trong phát triӇn các công cө (Fetal Bovine Serum huyӃt thanh bàochҭn ÿoán nhanh, trong ...