Tạo dòng và sản xuất protein tái tổ hợp của Toxocara canis

Bài viết Tạo dòng và sản xuất protein tái tổ hợp của Toxocara canis trình bày việc tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp TES120 của Toxocara canis để tạo nguồn kháng nguyên chủ động và ứng dụng vào kỹ thuật ELISA.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tạo dòng và sản xuất protein tái tổ hợp của Toxocara canis Vietnam Journal of Community Medicine, Vol. 64, Special Issue (2023) 146-152INSTITUTE OF COMMUNITY HEALTH CLONING AND EXPRESSION OF A RECOMBINANT PROTEIN OF TOXOCARA CANIS Dang Trinh Minh Anh*, Nguyen Thi Van Anh, Pham Nguyen Thuy Vy, Nguyen Thi Minh Chau, Tran Minh Qui, Tran Thi Khanh Quynh, Ngo Thi Hong Phuong,Nguyen Thi My Duyen, Nguyen Ho Quynh Ngan, Vo Huynh Minh Hien, Doan Binh Minh, Le Thanh Dong Ho Chi Minh City Institute of malariology, Parasitology and Entomology - 685 Tran Hung Dao, 1 ward, 5 district, Ho Chi Minh City, Vietnam Received 09/12/2022 Revised 13/01/2023; Accepted 10/02/2023 ABSTRACT Background: Human toxocariasis is a worldwide disease and it is caused by zoonotic roundworm species Toxocara canis and Toxocara cati. Diagnosis of human toxocariasis is based on the combination of clinical, epidemiological criteria, as well as serology tests that detect anti-Toxocara antibodies. Notwithstanding, serology is the key evidence to support a conclusive diagnosis. TES- ELISA is the most widely used serological test for diagnosis. However, insufficience of sources and cross-reaction of TES antigens with antibodies produced to other helminth antigens are major drawbacks for its application. Therefore, T. canis recombinant antigens have been decribed as an alternative to native TES for diagnosis. Objective: The aim is to clone and express the recombinant protein TES120 of Toxocara canis to produce an actively source of antigen and to apply to ELISA. Results: T. canis TES120 gene was isolated from T. canis adult worms (collected in Institute of Malariology, Parasitology and Entomology in Ho Chi Minh City) and expressed in E. coli expression system. TES120 gene had the size of 501 bp and was successfully inserted to pET28a. Then, plasmid pET28a-TES120 was transformed into E.coli BL21. Finally, TES120 recombinant protein was expressed at 37oC in 6h and had the size of 21 kDa. Conclusion: TES120 recombinant protein will be used as an antigen to develop ELISA test for toxocariasis. Keywords: TES120; Toxocariasis; Recombinant protein; IMPEHCM.*Corressponding author Email address: dangminhanh2484@gmail.com Phone number: (+84) 984 532 534 146 D.T.M. Anh et al. / Vietnam Journal of Community Medicine, Vol. 64, Special Issue (2023) 146-152 TẠO DÒNG VÀ SẢN XUẤT PROTEIN TÁI TỔ HỢP CỦA TOXOCARA CANIS Đặng Trịnh Minh Anh*, Nguyễn Thị Vân Anh, Phạm Nguyễn Thúy Vy, Nguyễn Thị Minh Châu, Trần Minh Quí, Trần Thị Khánh Quỳnh, Ngô Thị Hồng Phương,Nguyễn Thị Mỹ Duyên, Nguyễn Hồ Quỳnh Ngân, Võ Huỳnh Minh Hiền, Đoàn Bình Minh, Lê Thành ĐồngViện Sốt rét - Ký sinh trùng -Côn trùng TP. HCM - 685 Đ. Trần Hưng Đạo, phường 1, quận 5, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam Ngày nhận bài: 09 tháng 12 năm 2022 Chỉnh sửa ngày: 13 tháng 01 năm 2023; Ngày duyệt đăng: 10 tháng 02 năm 2023 TÓM TẮT Đặt vấn đề: Bệnh Toxocariasis là một bệnh giun sán phổ biến lây truyền từ động vật sang người do các loài giun tròn Toxocara canis and Toxocara cati gây ra. Để chẩn đoán bệnh Toxocariasis chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng, các yếu tố dịch tễ và huyết thanh học tìm kháng thể kháng Toxocara. Trong đó kết quả huyết thanh học của kỹ thuật ELISA được sử dụng chủ yếu để đưa ra kết luận chẩn đoán. Tuy nhiên kỹ thuật ELISA sử dụng nguồn kháng nguyên tiết mặc dù có độ nhạy cao nhưng bị hạn chế nguồn cung kháng nguyên và phản ứng chéo với kháng nguyên của các loài giun khác. Do đó để chủ động trong việc tạo ra nguồn kháng nguyên ổn định, có độ đặc hiệu cao sử dụng cho kỹ thuật ELISA thì protein tái tổ hợp là một lựa chọn thay thế. Mục tiêu: Tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp TES120 của Toxocara canis để tạo nguồn kháng nguyên chủ động và ứng dụng vào kỹ thuật ELISA Kết quả nghiên cứu: Đoạn gien mã hoá TES120 của Toxocara canis đã được phân lập từ mẫu T. canis trưởng thành thu thập tại Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng TP. HCM và biểu hiện trên hệ thống vi khuẩn E. coli. Đoạn gien TES120 có kích thước 501 bp được khuếch đại sau đó ghép nối ...