Thăm dò khả năng sản sinh kháng thể kháng độc tố vi tảo domoic acid của thỏ trắng New Zealand

Nhằm phục vụ phát triển bộ KIT ELISA phát hiện nhanh độc tố vi tảo domoic acid trong sản phẩm hải sản tại Việt Nam, kháng thể kháng độc tố này đã được thử nghiệm thu nhận bằng liệu pháp miễn dịch đối với thỏ trắng New Zealand, thông qua sử dụng 250 µg và 500 µg phức hợp kháng nguyên domoic acid - dissuccinyl substrate - bovine serum albumin.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thăm dò khả năng sản sinh kháng thể kháng độc tố vi tảo domoic acid của thỏ trắng New ZealandTạp chí Khoa học và Công nghệ Biển; Tập 16, Số 2; 2016: 176-182 DOI: 10.15625/1859-3097/16/2/8419 http://www.vjs.ac.vn/index.php/jmst THĂM DÒ KHẢ NĂNG SẢN SINH KHÁNG THỂ KHÁNG ĐỘC TỐ VI TẢO DOMOIC ACID CỦA THỎ TRẮNG NEW ZEALAND Đào Việt Hà Viện Hải dương học-Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam E-mail: daovietha69@gmail.com Ngày nhận bài: 6-1-2016 TÓM TẮT: Nhằm phục vụ phát triển bộ KIT ELISA phát hiện nhanh độc tố vi tảo domoic acid trong sản phẩm hải sản tại Việt Nam, kháng thể kháng độc tố này đã được thử nghiệm thu nhận bằng liệu pháp miễn dịch đối với thỏ trắng New Zealand, thông qua sử dụng 250 µg và 500 µg phức hợp kháng nguyên domoic acid - dissuccinyl substrate - bovine serum albumin. Thỏ đáp ứng miễn dịch sau 5 tháng thí nghiệm ở liều kháng nguyên 500 µg và chỉ một trong số 4 cá thể thỏ có hiệu ứng miễn dịch cao (OD > 3,0). Hiệu ứng miễn dịch này có xu hướng tăng nhanh và đạt giá trị cực đại sau tháng thứ 6, sau đó giảm nhanh ở các tháng tiếp theo. Dãy phát hiện domoic acid của kháng thể này khá rộng với sự biến thiên khá tuyến tính ở khoảng nồng độ pha loãng từ 1/800 đến 1/51.200. Với tín hiệu nền thấp, phân biệt phản ứng dương và âm rõ ràng, độ pha loãng 1/12.800 được chọn là đơn vị hiệu giá kháng thể. Tuy hiệu giá kháng thể trong nghiên cứu này khá thấp so với trong một số nghiên cứu khác nhưng không phát hiện phản ứng ức chế nào từ kainic acid, aspartic acid, glutamic acid, gamma-aminobutyric acid, globulin, proline, hydroxyproline (có cấu trúc hóa học tương tự domoic acid) đối với kháng thể. Kết quả này cho thấy kháng thể thu nhận bằng liệu pháp này có tính đặc hiệu với domoic acid, có thể sử dụng làm vật liệu cho bộ kít domoic acid -ELISA tại Việt Nam. Từ khóa: Domoic acid, ELISA, hiệu giá kháng thể, kháng thể kháng domoic acid.MỞ ĐẦU năng ức chế quá trình giải phóng hoạt chất ức chế gamma-aminobutyric acid (GABA) tại Độc tố vi tảo gây mất trí nhớ tạm thời vùng yên ngựa của thần kinh não bộ thông qua(Amnesic shellfish poisoning toxin - ASP hoạt động kích hoạt enzyme protein kinasetoxin) có bản chất hóa học là domoic acid (DA) (PK) dạng C. Tiếp theo đó, nồng độ cao của ion(khối lượng phân tử: 311 daltons, công thức Ca sẽ làm cho tế bào thần kinh trở nên sưngphân tử: C15H21NO6); là một axit amin có ba phồng và chết ở những vùng não bộ có quánhóm cacboxyl tồn tại ở dạng tinh thể, tan trình trao đổi chất glutamaine-rich [2]. Cáctrong nước, có tính axit. Theo Debonnel và điểm tiếp nhận này tập trung nhiều nhất ở khunnk., [1], ở động vật có vú, DA hoạt động như vực CA1 và CA3 của vùng đồi hải mã, nơi cóchất cạnh tranh glutamate, hủy hoại tế bào thần chức năng ghi nhớ và học - chính vì vậy, triệukinh bằng cách kết hợp với điểm tiếp nhận chứng mất trí nhớ trong thời gian ngắn nhưngglutamate, dẫn đến tình trạng kích hoạt quá không hồi phục là biểu hiện đặc trưng của ngộmức của tế bào. Sau khi được hấp thụ qua độc ASP ở người [3]. Takata và nnk., [4] đãthành ruột và dẫn đến hệ thần kinh trung tâm, phát hiện DA trong loài nhuyễn thể SpondylusDA tác động trực tiếp đến hệ thần kinh trung tại vùng biển châu Á bao gồm Nhật Bản, Tháitâm ở động vật bậc cao và người. Vì DA có khả Lan, Philippines và Việt Nam. Tiếp theo, Đào176 Thăm dò khả năng sản sinh kháng thể kháng …Việt Hà và nnk., [5] đã công bố kết quả ghi nghiệm. Kết quả nghiên cứu này nhằm thunhận hàm lượng DA rất cao (150 µg/g mô nhận kháng thể kháng DA cho mục tiêu chế tạomềm) trong loài hai mảnh vỏ Hàu Hương bộ KIT ELISA với giá thành thấp, thay thế cácSpondylus versicolor tại đầm Nha Phu, Khánh bộ KIT hiện đang mua từ nước ngoài, phục vụHòa, Việt Nam. Hiện nay, giới hạn an toàn của nhu cầu thị trường Việt Nam về an toàn thựcđộc tố DA trong sản phẩm hải sản được các phẩm biển một cách chủ động.quốc gia chấp nhận là 20 g/g mô mềm. Nhữngphát hiện gần đây cho thấy nguy cơ ngộ độc PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUDA tại khu vực châu Á bao gồm Việt Nam Gây miễn dịch trên thỏ trắng New Zealandđang ở mức độ cần cảnh báo. Tiếp cận và kế thừa các kết quả ngh ...