Thiết lập quy trình realtime PCR nhằm phát hiện kiểu gen HLA-B27 bệnh nhân viêm cột sống dính khớp tại Việt Nam

Viêm cột sống dính khớp (Ankylosing Spondylitis, AS) là tình trạng bệnh lý viêm tại các vị trí đốt sống và dính lại với nhau khiến các khớp xương kém linh động, lâu ngày các đốt sống này dính lại với nhau khiến tư thế đứng gập về phía trước. bài viết tập trung nghiên cứu quy trình multiplex realtime SYBR Green PCR phát hiện kiểu gen HLA-B27 giúp chẩn đoán bệnh lí viêm cột sống dính khớp.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thiết lập quy trình realtime PCR nhằm phát hiện kiểu gen HLA-B27 bệnh nhân viêm cột sống dính khớp tại Việt NamY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018 Nghiên cứu Y học THIẾT LẬP QUY TRÌNH REALTIME PCR NHẰM PHÁT HIỆN KIỂU GEN HLA-B27 BỆNH NHÂN VIÊM CỘT SỐNG DÍNH KHỚP TẠI VIỆT NAM Lương Bắc An*, Lê Thái Khương*, Đỗ Thị Thanh Thủy*.TÓM TẮT Mở đầu: Viêm cột sống dính khớp (Ankylosing Spondylitis, AS) là tình trạng bệnh lý viêm tại các vị trí đốtsống và dính lại với nhau khiến các khớp xương kém linh động, lâu ngày các đốt sống này dính lại với nhau khiếntư thế đứng gập về phía trước. Bệnh do nhiều yếu tố tác động, như tuổi tác, giới tính và yếu tố di truyền. Tuy chỉcó 5% dân số mang kiểu gen HLA-B27, nhưng có đến 95% bệnh nhân AS có mang kiểu gen dương tính HLA-B27. Do đó, dấu ấn HLA-B27 có thể xem là dấu ấn di truyền cho bệnh lý AS. Nhiều giả thuyết về cơ chế gâybệnh AS, những biến đổi tại các vị trí nucleotide trên gen kháng nguyên bạch cầu người (HLA) quy định kiểugen HLA-B27 được xem là tác động chính tới cơ chế gây bệnh. Hiện nay, viêm cột sống dính khớp chưa có thuốcđiều trị đặc hiệu. Phương pháp điều trị chủ yếu là giảm đau và kháng viêm giúp giảm các triệu chứng bệnh lý.Để tăng khả năng điều trị hiệu quả cho bệnh nhân thì việc xác định được nguyên nhân gây bệnh là yếu tố quantrọng nhất. Vì vậy, đối với bệnh nhân xuất hiện triệu chứng nghi ngờ bệnh lý AS thì việc phát hiện kiểu genHLA-B27 sẽ là một phương pháp giúp chẩn đoán bệnh sớm để có hướng phòng ngừa và điều trị kịp thời. Mục tiêu: Nghiên cứu quy trình multiplex realtime SYBR Green PCR phát hiện kiểu gen HLA-B27 giúpchẩn đoán bệnh lí viêm cột sống dính khớp. Phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang. Thiết kế cặp mồi và thiết lập điều kiện phản ứng multiplexrealtime PCR SYBR Green phát hiện kiểu gen HLA-B27. Giá trị của phương pháp được so sánh với bộ kít PG27(Pharmigene, Đài Loan) trên 10 mẫu DNA dương và 10 mẫu DNA âm tính với kiểu gen HLA-B27. Kết quả: Thiết kế cặp mồi và thiết lập được điều kiện phản ứng multiplex realtime PCR SYBR Green pháthiện kiểu gen HLA-B27. Dựa vào 20 mẫu DNA, kết quả kiểu gen HLA-B27 xác định bằng phương phápmultiplex realtime PCR SYBR Green và bộ kít thương mại PG27 (Pharmigene, Đài Loan) có sự tương đồng là100%. Kết luận: Nghiên cứu thiết lập được quy trình multiplex realtime PCR SYBR Green xác định kiểu genHLA-B27. Phương pháp cho kết quả tương đồng với bộ kít thương mại của nước ngoài. Nghiên cứu được quytrình có nhiều ý nghĩa thực tiễn như hạn chế phụ thuộc vào các bộ kít nước ngoài, giảm giá thành xét nghiệm,đáp ứng được nhu cầu làm xét nghiệm di truyền sinh học phân tử tại Việt Nam hiện nay. Từ khóa: HLA-B27, multiplex realtime SYBR Green PCR, Ankylosing Spondylitis.ABTRACTS. IDENTIFICATION OF HLA-B27 GENOTYPE IN VIETNAMESE ANKYLOSING SPONDYLITIS PATENTS BY USING REALTIME PCR. Luong Bac An, Le Thai Khuong, Do Thi Thanh Thuy * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 22 - No 2- 2018: 64 - 72 Introduction: Ankylosing spondylitis (AS) is an inflammatory condition in the vertebrae that make thejoints less flexible, these vertebrae later stick together making the standing posture bent forward. There are manyfactors such as age, gender, and genetic factors that affect this disease. Although the prevalence of HLA-B27 in* Trung tâm Y Sinh học Phân tử, Đại học Y Dược TP.HCMTác giả liên lạc: CN. Lương Bắc An ĐT: 0933.908.241 Email: luongbacan1991@gmail.com 65Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số 2 * 2018worldwide population is 5%, HLA-B27 appears in 95% of patients with ankylosing spondylitis. Thus, the HLA-B27 genotype may be a genetic marker for AS. Many theories have indicated the mechanism of AS, in which thenucleotide changes in the human leukocyte antigen (HLA) gene such as predominantly HLA-B27, to be the maincausative agent for AS. At present, the joint spondylosis has no specific drug treatment. The main treatments arepain relief and anti-inflammatory which help reduce the pathological symptoms. The important thing is thatdetermine the main cause of disease, so as improve effective treatment. Hence, identification of HLA-B27genotypeof patients with suspected AS disease symptoms can be concluded early and has the essential therapies. Objective: To study the multiplex real-time SYBR Green PCR approach for detecting the HLA-B27genotype in DNA obtained from patients with Ankylosing spondylitis. Methods: A cross-sectional descriptive study that used the DNA samples that is ...