THỬ VÔ KHUẨN

Qui định chung Kỹ thuật này áp dụng để thử vô khuẩn nhằm phát hiện sự có mặt của vi khuẩn, nấm mốc và nấm men trong các nguyên liệu, chế phẩm và dụng cụ mà theo tiêu chuẩn riêng cần phải vô khuẩn. Thử vô khuẩn phải được tiến hành trong điều kiện vô khuẩn như trong buồng thổi khí vô khuẩn hoặc trong buồng sạch để mẫu thử không bị ô nhiễm. Trong quá trình thử, mẫu không được tiếp xúc với các tác nhân có ảnh hưởng đến vi khuẩn, nấm mốc, nấm men (như: tia...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
THỬ VÔ KHUẨN THỬ VÔ KHUẨNQui định chungKỹ thuật này áp dụng để thử vô khuẩn nhằm phát hiện sự có mặt của vi khuẩn, nấmmốc và nấm men trong các nguyên liệu, chế phẩm và dụng cụ mà theo tiêu chuẩn riêngcần phải vô khuẩn. Thử vô khuẩn phải được tiến hành trong điều kiện vô khuẩn nhưtrong buồng thổi khí vô khuẩn hoặc trong buồng sạch để mẫu thử không bị ô nhiễm.Trong quá trình thử, mẫu không được tiếp xúc với các tác nhân có ảnh h ưởng đến vikhuẩn, nấm mốc, nấm men (nh ư: tia tử ngoại, chất sát khuẩn, nhiệt độ cao ...). Cácdụng cụ, dung môi, môi trường nuôi cấy phải được diệt khuẩn trước khi dùng.Phương pháp thửNguyên tắcNếu vi khuẩn, nấm mốc, nấm men được cấy vào môi trường có chất dinh dưỡng vànước, được giữ ở điều kiện nhiệt độ thích hợp thì chúng sẽ phát triển. Sự có mặt của visinh vật làm cho môi trường biến đổi trạng thái từ trong sang đục, hoặc có cặn lắng ởđáy môi trường, hoặc thay đổi màu sắc môi trường.Chọn một trong hai phương pháp thử thường dùng là phương pháp màng lọc hoặcphương pháp cấy trực tiếp. Khi tiến hành thử phải làm sạch bề ngoài của ống (hoặcchai, lọ, bình ...) đựng chế phẩm bằng một chất sát khuẩn thích hợp. Sau đó lấy mộtlượng chế phẩm đủ dùng theo qui định, cấy trực tiếp vào môi trường (nếu theo phươngpháp cấy trực tiếp) hoặc theo phương pháp màng lọc: Đem chế phẩm sau khi đã đượchoà loãng với dung môi thích hợp lọc qua màng lọc, rồi cắt các màng lọc thành miếngnhỏ đem nhúng vào môi trường, ủ môi trường đã cấy chế phẩm hoặc cấy màng lọctrong thời gian qui định.Chuẩn bị môi trường và dung môiMôi trường để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và kỵ khíMôi trường thioglycolat có thạch (dùng cho thử nghiệm những chế phẩm lỏng vàtrong).Môi trường thioglycolat không có thạch (dùng cho thử nghiệm những chế phẩm đặchoặc đặc sền sệt dạng cao).Môi trường Soybean - casein (để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và nấm mốc)Cả hai loại môi trường trên phải được pha chế và kiểm tra chất lượng theo đúng qui định ởmục Cách pha chế và kiểm tra chất lượng các môi trường trước khi dùng.Dung môi dùng để hoà loãngKhi những mẫu thử không ở dạng dung dịch lỏng, cần hoà loãng để thử nghiệm. Chỉđược dùng làm dung môi hoà loãng là một chất lỏng bất kỳ không có tính kháng khuẩnvà không tác động đến độ xốp của màng lọc. Thường dùng các dung môi sau đây:Dung môi A: Hoà tan 1 g pepton vào nước cho vừa đủ 1 lít. Lọc (hoặc ly tâm) chotrong. Điều chỉnh pH bằng 7,1  0,2. Đựng vào nhiều bình, mỗi bình khoảng 100 ml.Hấp ở 1210 C trong 18 - 20 phút.Dung môi B: Như dung môi A, nhưng thêm 1 ml polysorbat 80 cho 1 lít dung môi,dùng để hoà loãng những chế phẩm thử có lecithin.Dung môi C: isopropyl myristatDùng để pha loãng những chế phẩm dạng dầu hay dung dịch dầu.Tiến hành thử theo phương pháp màng lọcDụng cụCác dụng cụ dùng trong thử nghiệm phải đảm bảo vô khuẩn gồm:- Các ống nghiệm hoặc các bình đựng môi trường.- Bộ lọc gồm có: Phễu lọc, giá đỡ màng lọc, bình hứng, và các phụ kiện để ghép nối;hệ thống hút chân không.- Màng lọc: Thường dùng loại có dường kính lỗ lọc khoảng 0,2 - 0,45 m. Loại màngCellulose nitrat được dùng cho các chế phẩm dạng nước, dạng dầu và các dung dịch cólượng cồn thấp độ. Loại màng lọc dạng cellulose acetat đ ược dùng cho các chế phẩmdạng có nồng độ cồn cao. Đặc biết đối với các chế phẩm kháng sinh cần phải chọn loạimàng lọc thích hợp đảm bảo không còn dư lượng kháng sinh trên màng sau khi lọc.- Kéo cắt màng lọc.Lượng mẫu thử cần dùng cho một lần thử nghiệmTuỳ theo từng loại mẫu thử, lấy số lượng thích hợp theo qui định ở bảng 1. Bảng 1. Loại mẫu thử Lượng tối thiểu chế phẩm cần lấy STT Dung dịch thuốc tiêm có chứa 1 trong Toàn bộ một đơn vị đóng gói một đơn vị đóng gói: - Dưới 1 ml 1/2 đơn vị đóng gói - Có từ 1 đến ít hơn 4 ml 2 ml - Có từ 4 đến ít hơn 20 ml 2 2 - 10 ml - Có từ 20 đến 100 ml 1/2 đơn vị đóng gói - Lớn hơn 100 ml 5 - 10 ml của dung dịch đã hoà 3 loãng đến 10 lần (tt/tt) bằng dung Dung dịch thuốc nhỏ mắt và các môi thích hợp nêu ở (mục c) chế phẩm lỏng không tiêm 0,5 - 1 g mẫu thử đã được hoà loãng thành dung dịch với tỉ lệ 1% (kl/tt) Những mẫu thử là chất rắn, dịch bằng dung môi thích hợp (nêu ở treo, nhũ dịch, kem, hoặc thuốc mục dung môi dùng để hoà loãng) mỡ.Kỹ thuật thửDùng dung môi A vừa đủ để thấm ướt màng lọc. Rót lên màng lọc một lượng mẫu cần thửnhư qui định ở bảng 1. Dùng máy hút chân khôn ...