Tìm hiểu đột biến kháng adefovir và lamivudine trên HBV tách chiết từ huyết thanh bệnh nhân viêm gan B mãn tính

Nghiên cứu với mục tiêu tìm hiểu đột biến kháng adefovir và lamivudine trên HBV tách chiết từ huyết thanh bệnh nhân viêm gan B mãn tính. Thực hiện một nghiên cứu trên 894 bệnh nhân viêm gan B mãn tính để về vấn đề này. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tìm hiểu đột biến kháng adefovir và lamivudine trên HBV tách chiết từ huyết thanh bệnh nhân viêm gan B mãn tínhY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010Nghiên cứu Y họcTÌM HIỂU ĐỘT BIẾN KHÁNG ADEFOVIR VÀ LAMIVUDINETRÊN HBV TÁCH CHIẾT TỪ HUYẾT THANH BỆNH NHÂNVIÊM GAN B MÃN TÍNH1Đặng Mai Anh Tuấn ,Võ Đức Xuyên An*, Phạm Hùng Vân**TÓM TẮTĐặt vấn ñề: Hiện nay ở các quốc gia vùng châu Á nói chung và Việt Nam nói riêng, bệnh viêmgan mạn do hepatitis B virus (HBV) gây ra vẫn là căn bệnh rất phổ biến nhưng chỉ có một vài loạithuốc ñặc trị trong ñó thường ñược dùng là lamivudine (LMV), adefovir (ADV), tenofovir vàentecavir. Tuy nhiên, virus HBV lại có khả năng kháng ñược các thuốc có dẫn xuất từ nucleoside nàyvới tốc ñộ nhanh hay chậm tùy vào bản thân virus mang ñột biến giúp phục hồi khả năng sinh sảnngay dưới áp lực của thuốc. Do ñó việc quyết ñịnh loại thuốc ñặc trị cho từng trường hợp phải căn cứvào từng loại ñột biến cụ thể của loại virus HBV tương ứng. Hiện tại Việt Nam chưa có nghiên cứutình hình kháng thuốc virus trên thể tích mẫu lớn nhằm hiểu rõ hơn thực trạng này.Mục tiêu nghiên cứu: Thực hiện một nghiên cứu trên 894 bệnh nhân viêm gan B mãn tính ñể tìmhiểu tình hình ñột biến kháng thuốc Adefovir và Lamivudine.Đối tượng và phương pháp: Các mẫu bệnh phẩm ñược thu thập từ các bệnh viện. Thực hiệnñịnh lượng HBV DNA bằng realtime PCR trên máy iQ5 với bộ thuốc thử HBV-TQPCR do công tyNam Khoa sản xuất sau khi ñã ly trích DNA từ mẫu bệnh phẩm bằng phương pháp Boom. Tiếp ñóthực hiện khuếch ñại vùng gen HBV polymerase rồi ñưa vào hệ thống giải trình tự tự ñộng ABI3130xl ñể xác ñịnh ñột biến và kiểu gen HBV.Kết quả nghiên cứu: Việc ñịnh lượng HBV DNA với bộ thuốc thử HBV-TQPCR do công ty NamKhoa sản xuất ñạt ñược ñộ tin cậy cần thiết với ngưỡng phát hiện thấp nhất 200 copies/ml (hiệu suấtPCR 95%-105% có hệ số tương quan R2≥0,99). Thông qua việc giải trình tự vùng gen phiên mãngược của HBV, chúng tôi xác ñịnh kiểu gen B, C rất phổ biến và tỷ lệ tương quan giữa chúng 3:1cũng như xác ñịnh chính xác từng ñiểm ñột biến. Chúng tôi nhận thấy tỷ lệ HBV kháng LMV tuy caohơn ADV nhưng vẫn ở mức thấp 4,70%.Kết luận: Lamivudine vẫn là thuốc chữa trị hiệu quả và giải trình tự gen polymerase là công cụdễ tiếp cận ñể nâng cao hiệu quả ñiều trị.Từ khoá: HBV, kháng lamivudine, kháng adefovir.ABSTRACTSURVEILLANCE OF THE MUTATIONS RESPONSIBLEFOR ADEFOVIR AND LAMIVUDINE RESISTANCE ON THE HBV EXTRACTEDFROM PATIENTS’ SERA WITH CHRONIC HEPATITIS BDang Mai Anh Tuan, Vo Duc Xuyen An, Hoang Hieu Ngoc, Pham Hung Van* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 14 - Supplement of No 2 – 2010: 287 - 293Background: Nowadays chronic hepatitis caused by HBV is most commonly found in Asiaespecially in Vietnam. There’s just some potent antiviral agent specific for HBV such as lamivudine(LMV), adefovir(ADV), tenofovir and entecavir, however, HBV could develop the resistance to thesedrug based on the primary and compensatory resistance mutations that recover their replicationcapability under drug force. It is easily to see that choosing potent drug for each case depend on whatkind of mutation points is. Until now, there’s not still a research on lots of specimens for making clearthis situation in VietNam yet.1Công ty Nam Khoa, **Đại Học Y Dược TP. HCMĐịa chỉ liên lạc:TS.Phạm Hùng VânEmail: phhvan.nkbiotek@gmail.comHội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010287Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010Nghiên cứu Y họcObject: Carrying-out a research on 894 serum samples collected from patients with chronichepatitis causing by HBV in order to detect the mutations related to adefovir and lamivudineresistance.Materials and method: Sera collected from patients with defined HBV chronic hepatitis. TheHBV DNA load in the sera were detected by real-time PCR on iQ5 system using HBV-TQPCR kitsupplied by Nam Khoa Co. after extracting DNA with BOOM method. Then targeted HBVpolymerase region are amplified and sequenced on ABI 3130xl Genetic Analyzer for detectingmutation points and genotyping.Results: HBV DNA quantification detected by Nam Khoa HBV PCR TQ Plus kit yielded a limit ofdetection of 200 copies/ml, with good PCR efficiency 95-105% and correlation (R2 = 1.00). Base onsequencing result of the HBV reverse transcriptase region, we not only confirm genotype B, C isdominated in VietNam that produced 3:1 ratio but also detect exactly every resistance mutationpoints. Although lamivudine resistant HBV rate is higher than adefovir, is still at low level (4.70%).Conclusions: Up to now Lamivudine is still a useful drug and HBV polymerease genesequencing method is an efficient, available approach to improve treatment effectively.Keywords: HBV, Lamivudine resistance, Adefovir resistance.ĐẶT VẤN ĐỀMặc dù cách nay hơn 40 năm Krugman và cộng sự ñã phát hiện HBV và sau ñó các nhà khoa họctiếp tục chế tạo thành công n ...