Tối ưu hoá qui trình thuỷ phân flavonoid và xây dựng quy trình định lượng flavonoid từ dịch thuỷ phân lá trinh nữ hoàng cung bằng phương pháp HPLC

Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm nghiên cứu các điều kiện thủy phân flavonoid toàn phần để thu được flavonoid dạng aglycon và áp dụng phần mềm tối ưu hoá để xác định các điều kiện thuỷ phân flavonoid tối ưu. Từ đó xây dựng qui trình định lượng quercetin và kaempferol bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tối ưu hoá qui trình thuỷ phân flavonoid và xây dựng quy trình định lượng flavonoid từ dịch thuỷ phân lá trinh nữ hoàng cung bằng phương pháp HPLC Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học TỐI ƯU HOÁ QUI TRÌNH THUỶ PHÂN FLAVONOID VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG FLAVONOID TỪ DỊCH THUỶ PHÂN LÁ TRINH NỮ HOÀNG CUNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC Hoàng Anh Việt*, Dương Thị Đan Thanh*,Nguyễn Thị Kim Oanh, *Nguyễn Hữu Lạc Thủy*, Võ Thị Bạch Huệ* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu các điều kiện thủy phân flavonoid toàn phần để thu được flavonoid dạng aglycon và áp dụng phần mềm tối ưu hoá để xác định các điều kiện thuỷ phân flavonoid tối ưu. Từ đó xây dựng qui trình định lượng quercetin và kaempferol bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Phương pháp: Khảo sát các phương pháp chiết xuất flavonoid toàn phần và tối ưu hoá các điều kiện thủy phân flavonoid toàn phần từ lá TNHC. Từ mẫu thử là flavonoid aglycon thu được, xây dựng và thẩm định qui trình định lượng đồng thời quercetin và kaempferol trong lá TNHC bằng phương pháp HPLC. Kết quả: Tìm được phương pháp chiết xuất flavonoid bằng phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn và các điều kiện thủy phân flavonoid đến dạng aglycon. Xây dựng được qui trình định lượng đồng thời quercetin và kaempferol bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và tối ưu hóa các thông số thủy phân flavonoid theo mô hình Box-Behnken. Kết luận: Các kết quả nghiên cứu có thể ứng dụng chiết flavonoid toàn phần và thuỷ phân dịch chiết với điều kiện tối ưu nhất để thu được flavonoid aglycon với lượng lớn, qui trình định lượng đạt các yêu cầu thẩm định nên có thể sử dụng để kiểm tra chất lượng nguyên liệu TNHC. Từ khóa: Trinh Nữ Hoàng Cung, flavonoid, chiết lỏng siêu tới hạn, sắc ký lỏng hiệu năng cao, kaempferol, quercetin... ABSTRACT OPTIMIZED FLAVONOID HYDROLYSIS AND CONSTRUCTION FLAVONOID QUANTITATIVE PROCESS BY HPLC FROM HYDROLYSIS EXTRACT OF CRINUM LATIFOLIUM LEAVES Hoang Anh Viet, Dương Thi Dan Thanh, Nguyen Thi Kim Oanh, Nguyen Huu Lac Thuy, Vo Thi Bach Hue* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 455 - 462 Objectives: In oder to improve the quality control as well as to isolate flavonoid compounds from Crinum latifolium L. Conditions for flavonoid extraction and simultaneous quantitation of quercetin and kaempferol in the leaf extract by HPLC was established. Methods: Study on conditions for total flavonoid extraction by super - critical fluid and hydrolysis conditions for flavonoid in the leaf powder of Crinum latifolium L was done. The simultaneous quantitation quercetin and kaempferol in leaf extract by HPLC was established. Results: The assay simultaneous of 2 theses flavonoids was studied by LC-DAD method. We also presented the optimization of the hydrolysis procedure (Box-Behnken schema). Conclusions: The simultaneous quantitation method of quercetin and kaempferol in leaf extract *Bộ môn Phân tích – Kiểm nghiệm - Khoa Dược - Đại học Y Dược Tp. HCM Tác giả liên hệ: ThS. Hoàng Anh Việt ĐT: 0908260987 Email: viethoanganh82@yahoo.com.vn Chuyên Đề Dược Khoa 455 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 was built and validated with all requirements such as specificity, repeatability, accuracy, linearity and system suitability. This is the first time of fast, simple HPLC method is reported for the simultaneous quantitative determination of quercetin and kaempferol in Crinum latifolium L. material. Key words: Crinum latifolium, flavonoid, HPLC, quercetin, kaempferol… ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp nghiên cứu: Cho đến nay, có nhiều công trình nghiên cứu lâm sàng đã chứng minh lá Trinh Nữ Hoàng Cung (TNHC) có tác dụng chữa khỏi bệnh u phì đại lành tính tuyến tiền liệt góp phần mang lại niềm tin của bệnh nhân đối với cao chiết từ lá cây TNHC. Đã có nhiều báo cáo về thành phần hóa học của lá TNHC thuộc các nhóm hoạt chất chính như alkaloid, flavonoid(4,5) và với định hướng chiết cũng như ứng dụng phần mềm tối ưu hóa(1,2,3) nhằm xác định các điều kiện thuỷ phân flavonoid toàn phần tốt nhất để thu được flavonoid aglycon với hiệu suất cao, nên chúng tôi chọn đề tài “Tối ưu hoá qui trình thuỷ phân flavonoid và xây dựng qui trình định lượng flavonoid từ dịch thuỷ phân lá Trinh Nữ Hoàng Cung (Crinum latifolium L. Amaryllidaceae) bằng phương pháp HPLC” Khảo sát quy trình chiết flavonoid toàn phần Bột lá Trinh Nữ Hoàng Cung được chiết xuất bằng cách thăm dò 2 phương pháp khác nhau. ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu: Lá Trinh Nữ Hoàng Cung thu hái tại Bình Định vào tháng 5 năm 2010. Chất đối chiếu, hóa chất, dung môi - Chất đối chiếu: quercetin do Viện kiểm nghiệm cung cấp, độ tinh khiết 91,34 % và kaempferol do Sigma - Aldrich, Singapore cung cấp, độ tinh khiết ≥ 96%. - Trang thiết bị: máy HPLC hiệu Waters, Model Alliance 2695; Detector PDA; Cột Phenomenex Luna 5u C18(2) 100A0, 250 x 4,6 mm, 5 μm; bể siêu âm Elma (Đức); máy đo pH hiệu Metrohm (Đức); cân p ...