Ứng dụng kháng nguyên TES-30 tái tổ hợp xác định kháng thể IgG trong huyết thanh bệnh nhân nhiễm Toxocara bằng kỹ thuật ELISA

Bài viết Ứng dụng kháng nguyên TES-30 tái tổ hợp xác định kháng thể IgG trong huyết thanh bệnh nhân nhiễm Toxocara bằng kỹ thuật ELISA trình bày việc sử dụng kháng nguyên TES (Toxocara Excretory-Secretory) tái tổ hợp làm nguyên liệu tạo bộ sinh phẩm ELISA phát hiện kháng thể IgG kháng ấu trùng giun đũa chó/mèo để khắc phục nhược điểm về độ nhạy và độ đặc hiệu thấp khi sử dụng kháng nguyên thô TES.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kháng nguyên TES-30 tái tổ hợp xác định kháng thể IgG trong huyết thanh bệnh nhân nhiễm Toxocara bằng kỹ thuật ELISATẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 7 - 2023 ỨNG DỤNG KHÁNG NGUYÊN TES-30 TÁI TỔ HỢP XÁC ĐỊNH KHÁNG THỂ IgG TRONG HUYẾT THANH BỆNH NHÂN NHIỄM TOXOCARA BẰNG KỸ THUẬT ELISA Nguyễn Thị Hà Trinh1, Nguyễn Minh Quyền2, Hoàng Thị Ngọc Diệp2 Hoàng Thị Hòa3, Đỗ Như Bình2, Lê Quốc Tuấn2*, Nguyễn Khắc Lực2 Tóm tắt Mục tiêu: Sử dụng kháng nguyên TES (Toxocara Excretory-Secretory) tái tổ hợplàm nguyên liệu tạo bộ sinh phẩm ELISA phát hiện kháng thể IgG kháng ấu trùnggiun đũa chó/mèo để khắc phục nhược điểm về độ nhạy và độ đặc hiệu thấp khisử dụng kháng nguyên thô TES. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu mô tảbằng thực nghiệm trong phòng thí nghiệm, sử dụng kháng nguyên TES-30 tái tổhợp biểu hiện trong vi khuẩn E. coli BL21 (DE3) chế tạo bộ sinh phẩm ELISAđể phát hiện kháng thể IgG kháng ấu trùng giun đũa chó/mèo lưu hành trong máungười. Kết quả: Chế tạo thành công bộ sinh phẩm ELISA sử dụng kháng nguyêntái tổ phát hiện các kháng thể IgG kháng Toxocara spp… Nồng độ TES-30 tối ưusử dụng trong phản ứng ELISA là 1 µg/mL, giá trị OD cut-off xác định kết quảdương tính là 0,4 giúp chẩn đoán nhiễm Toxocara spp. với độ nhạy 93,3% và độđặc hiệu đạt 100%. Kết luận: Phát triển thành công bộ sinh phẩm ELISA sử dụngTES-30 tái tổ hợp phát hiện kháng thể IgG kháng ấu trùng giun đũa chó/mèo. Từ khóa: Kháng nguyên tiết Toxocara; Protein tái tổ hợp TES-30; Biểu hiện. APPLICATION OF RECOMBINANT TES-30 ANTIGEN TO DETECT IgG ANTIBODY IN SERA OF TOXOCARIASIS PATIENTS BY ELISA TECHNIQUE Abstract Objectives: To use recombinant TES protein to improve the quality of theELISA kit detecting anti-TES IgG in the infected sera to lessen the disadvantages1 Đại học Y Dược Buôn Ma Thuột2 Học viện Quân y3 Đại học Điều dưỡng Nam Định*Tác giả liên hệ: Lê Quốc Tuấn (tuanisation@gmail.com) Ngày nhận bài: 29/6/2023 Ngày được chấp nhận đăng: 22/8/2023http://doi.org/10.56535/jmpm.v48i7.41284 TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 7 - 2023of raw TES-based ELISA kit as low sensitivity and specificity. Methods:Descriptive experimental study in the laboratory using recombinant TES-30(rTES-30) protein expressed in E. coli BL21 (DE3) to develop an ELISA kit todetect IgG antibody in the sera of infected patients. Results: A recombinant TES-based ELISA kit has been produced. The concentration of recombinant TES-30protein was 1 µg/mL and the cut-off value was 0.4. The sandwich ELISA usingrTES-30 possessed a sensitive level reaching 93.3% and a specificity of 100%.Conclusion: A recombinant TES-based ELISA kit has been successfullydeveloped for human anti-TES IgG detection. This recombinant protein heldgreat potential for developing diagnostic tests for Toxocariasis in Vietnam. Keywords: Toxocara spp. excretory/secretory antigen; Recombinant proteinTES-30; Expression. ĐẶT VẤN ĐỀ Tuy nhiên, do ký sinh trùng có sự Bệnh Toxocariasis là sự nhiễm bệnh chia sẻ kháng nguyên nên việc sử dụngcủa con người với ấu trùng giun đũa các kháng nguyên tiết dễ dẫn đến sựtròn động vật (Toxocara canis từ chó phản ứng chéo với kháng nguyên củavà Toxocara cati từ mèo) và đang là loài khác, gây ảnh hưởng đến kết quảvấn đề sức khỏe được quan tâm của chẩn đoán [4, 5]. Ngoài ra, sử dụngcộng đồng khoa học trên thế giới [1, kháng nguyên thô thu từ môi trường2]. Đa số người bệnh không có biểu nuôi ấu trùng có nhược điểm là khônghiện triệu chứng đặc hiệu, triệu chứng có sự ổn định về năng suất và chấtchính là ngứa ở da thường gặp ở nhiều lượng. Các nghiên cứu cho thấy sửbệnh lý khác dẫn tới khó khăn trong dụng kháng nguyên tiết tái tổ hợp làmviệc chẩn đoán [3]. Hiện nay, chẩn nguyên liệu tạo bộ sinh phẩm ELISAđoán nhiễm Toxocara spp. được tiến đã khắc phục được các nhược điểm củahành phổ biến bằng kỹ thuật ELISA kháng nguyên thô. Ứng dụng côngphát hiện kháng thể đặc hiệu trong nghệ DNA tái tổ hợp, chúng tôi đãhuyết thanh. Nhiều bộ kít ELISA sử biểu hiện thành công protein khángdụng nguyên liệu là kháng nguyên tiết nguyên TES-30 trong tế bào E. coli(Toxocara excretory-secretory hay BL21 (DE3) nhằm: Xác định kháng thểTES antigens) của ấu trùng chiết xuất IgG lưu hành trong huyết thanh củatừ trứng có phôi (embryonated eggs) bệnh nhân (BN) bị nhiễm Toxocarahoặc giải phóng ra khi nuôi cấy ấu trùng. bằng kỹ thuật ELISA. 85TẠP CHÍ Y DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 7 - 2023ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP thanh âm tính và 96 mẫu huyết thanh NGHIÊN CỨU ...