Ứng dụng kỹ thuật inverse‐shifting PCR xác định đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh hemophilia A thể nặng

Đề tài này được tiến hành với mục tiêu nhằm xác định đột biến đảo đoạn intron 22 ở bệnh nhân hemophilia A thể nặng và người nữ dị hợp tử trong gia đình bệnh nhân. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật inverse‐shifting PCR xác định đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh hemophilia A thể nặngNghiêncứuYhọcYHọcTP.Hồ ChíMinh*Tập18*PhụbảncủaSố 5*2014ỨNGDỤNGKỸTHUẬTINVERSE‐SHIFTINGPCRXÁCĐỊNHĐỘTBIẾNĐẢOĐOẠNINTRON22GÂYBỆNHHEMOPHILIAATHỂNẶNG NguyễnHữuHuy*,NguyễnThịBăngSương**,ĐỗThịThanhThủy**,NgôThịHồngPhước**TÓMTẮTMở đầu: HemophiliaAlàbệnhditruyềnlặnliênkếtvớinhiễmsắcthểgiớitínhXdosựthiếuhụthoặckhiếmkhuyếtyếutốVIII,mộtloạiproteinđôngmáu.TầnsuấtmắcbệnhhemophiliaAlà1/5000trẻtrai.BệnhHemophiliaAthểnặng(nồngđộyếutốVIIIthấphơn1%)chiếmkhoảng40%cáctrườnghợpmắcbệnh.Bệnhnhânmắcbệnhdễxuấthuyếtdochấnthươnghaytựphát,tụmáutrongcơ,chảymáuởkhớp.Độtbiếnđảođoạnintron22gâyra40‐50%cáctrườnghợpHemophiliaAthểnặng.Mụctiêu:Xácđịnhđộtbiếnđảođoạnintron22ởbệnhnhânHemophiliaAthểnặngvàngườinữdịhợptửtronggiađìnhbệnhnhân.Đốitượngvàphươngphápnghiêncứu:Thựchiệnphântích2giađìnhvới2bệnhnhânnamđượcchẩnđoánHemophiliaAthểnặngvà5thànhviênnữ.PhảnứngInversePCRgồm3bước:(a)cắtbằngenzymeBclI;(b)nốilạisảnphẩmcắttạoDNAvòng;(c)thựchiệnphảnứngmultiplexPCRvàđọckếtquả.Kếtquả:Pháthiện2bệnhnhânnammangđộtbiếnđảođoạnintron22,4ngườinữdịhợptửlàngườilànhmanggenbệnhvà1ngườinữđangcóthailàngườibìnhthường.Kếtluận:ChúngtôiđãứngdụngthànhcôngkỹthuậtInversePCRđểpháthiệnđộtbiếnđảođoạnintron22gâybệnhHemophiliaAthểnặngởbệnhnhânvàngườilànhmanggenbệnh.Từkhoá:InversePCR,đảođoạnintron22,HemophiliaAABSTRACTAPPLICATIONINVERSE‐SHIFTINGPCRTOIDENTIFYINVERSIONINTRON22CAUSEOFSEVEREHEMOPHILIAANguyenHuuHuy,NguyenThiBangSuong,DoThiThanhThuy,NgoThiHongPhuoc*YHocTP.HoChiMinh*Vol.18‐SupplementofNo5‐2014:202‐207Introduction: HemophiliaAisarecessiveX‐linkedgeneticdisordercausedbymissingordefectivefactorVIII,aclottingprotein.HemophiliaAoccursinapproximately1in5,000livebirths.SeverehemophiliaA(factorlevelslessthan1%)representsapproximately40%ofcases.PeoplewithseverehemophiliaAexperiencebleedingfollowinganinjuryandmayhavefrequentspontaneousbleedingepisodes,oftenintotheirjointsandmuscles.FactorVIIIintron22inversions(Inv22)cause40%–50%ofseverecasesofhemophiliaA.Objective:Identifyinversionintron22insevereHemophiliaApatientsandheterozygousfemalecarriers.Patients and Method: To conduct the genetic analysis in 2 families of 2 patients diagnosed of severehemophilia A and 5 female members. Inverse PCR involved 3 steps: (a) BclI restriction; (b) self‐ligation ofrestrictionfragments,providingBclIrings;and(c)standardmultiplex‐PCRanalysis.Results:2malepatientshadintron22inversion,4femalememberswerecarrierand1femalemember,whowaspregnant,wasfortunatelynoncarrier.Conclusion: We have successfully applied inverse PCR to identify inversion intron 22 cause of severeHemophiliaA.Thishelpedforthedetectionofpatientsandidentificationoffemalecarriers.Keywords:InversePCR,inversionintron22,HemophiliaA*Khoasinhhọc,ĐạihọcKhoahọctựnhiên,TPHCM. **ĐạihọcYDượcTPHCM.Tácgiảliênlạc:TS.BSNguyễnThịbăngSương ,ĐT:0914007038 ,Email:suongnguyenmd@gmail.com202ChuyênĐềĐiềuDưỡngKỹThuậtYHọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập18*Phụ bảncủaSố 5*2014ĐẶTVẤNĐỀHemophilia A là căn bệnh rối loạn đôngmáuditruyềnnghiêmtrọngdosựthiếuhụthaykhiếmkhuyếtyếutốVIIIđồngthờiđâycũnglàcănbệnhditruyềnlặnliênkếtvớinhiễmsắcthểgiớitínhXphổbiếnnhấtvớitầnsuấtmắcbệnhlà1/5000trẻtrai(1).Nguyênnhângâybệnhlàdođột biến trên gen F8 nằm trên cánh dài nhiễmsắcthểgiớitínhXtạivịtríXq28,gencóchiềudài186kb,gồm26exonvàmãhóachoRNAdài9kb(3). Sản phẩm của gen F8 là yếu tố VIII nằmtrongphứchợphoạthóayếutốXđóngvaitròrất quan trọng trong con đường đông máu, sựthiếu hụt yếu tố VIII sẽ dẫn đến rối loạn đôngmáuvàcácbiểuhiệnlâmsànglàxuấthuyếttựpháthaydochấnthươngnhẹ,tụmáutrongcơ,chảy máu ở khớp, đôi khi có tiểu máu. BệnhHemophila A được chia thành 3 loại dựa vàonồngđộyếutốVIIItronghuyếtthanh:thểnặngkhiyếutốVIIIcónồngđộrấtthấp( ...