Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR để phát hiện virus dịch tả lợn dựa trên đoạn gen ncE2

Nghiên cứu này nhằm ứng dụng vào công tác chẩn đoán bệnh và tạo tiền đề cho những nghiên cứu xác định chủng, phân loại di truyền virus dịch tả lợn sau này. Nghiên cứu được thực hiện nhằm ứng dụng kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction) để chẩn đoán bệnh dịch tả lợn cổ điển dựa trên đoạn gen ncE2 của virus. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ứng dụng kỹ thuật RT-PCR để phát hiện virus dịch tả lợn dựa trên đoạn gen ncE2 DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI Bò cái sinh sản có KL 367,66kg; TGĐDLSĐ 4. Trương Văn Hiểu và Nguyễn Thị Kim Quyên (2021). Hiện trạng nuôi bò sinh sản tại tỉnh Trà Vinh. Tạp chí 78,58 ngày; SLPGĐT là 1,71 lần. Bò cái tơ có KHKT Chăn nuôi, 265(5.21): 52-58. KL là 308,20kg; TĐDLĐ là 17,06 tháng tuổi; 5. Phí Như Liễu, Nguyễn Văn Tiến và Hoàng Thị Ngân TPGLĐ là 18,13 tháng tuổi và SLPGĐT là 1,58 (2017). Kết quả lai tạo và nuôi dưỡng bê lai hướng thịt tại lần/thai. An Giang. Tạp chí KHCN Chăn nuôi, 76(6.17): 91-99. 6. Phạm Văn Quyến, Giang Vi Sal, Huỳnh Văn Thảo, TÀI LIỆU THAM KHẢO Trầm Thanh Hải, Trần Văn Nhứt, Thạch Thị Hòn và Trần Văn Trước (2019). Kết quả điều tra, khảo sát tình 1. Chi cục thống kê các huyện Châu Thành, Cầu Kè, Tiểu hình phát triển chăn nuôi bò và thị trường tiêu thụ thịt Cần, Cầu Ngang, Trà Cú, Duyên Hải, TX. Duyên Hải, bò tại huyện Trà Cú, tỉnh Trà Vinh. Tạp chí KHCN Chăn Càng Long và TP. Trà Vinh (2017-2019). Báo cáo kết quả nuôi, 101(7.19): 78-88. điều tra chăn nuôi 2017-2019. 7. Phạm Văn Quyến, Hoàng Thị Ngân, Nguyễn Thị Thủy, 2. Cục thống kê tỉnh Trà Vinh (2017-2019). Niên giám Nguyễn Văn Tiến, Giang Vi Sal, Bùi Ngọc Hùng, Lê thống kê 2017-2019. Việt Bảo, Nguyễn Minh Trí và Phạm Văn Tiềm (2021). 3. Cục Chăn nuôi (2017-2019). Số liệu thống kê số lượng bò Hiện trạng chăn nuôi bò lai hướng thịt tại TP. Hồ Chí phân theo địa phương năm 2017-2019. Minh. Tạp chí KHKT Chăn nuôi, 266(6.21): 34-40. ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VIRUS DỊCH TẢ LỢN DỰA TRÊN ĐOẠN GEN NCE2 Trần Đức Hoàn1*, Đoàn Thị Thảo1, Nguyễn Thị Hương Giang1 và Nguyễn Đình Nguyên1 Ngày nhận bài báo: 30/03/2021 - Ngày nhận bài phản biện: 30/04/2021 Ngày bài báo được chấp nhận đăng: 04/05/2021 TÓM TẮT Nghiên cứu được thực hiện nhằm ứng dụng kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction) để chẩn đoán bệnh dịch tả lợn cổ điển dựa trên đoạn gen ncE2 của virus. Giống virus được sử dụng trong nghiên cứu được phân lập từ lợn chết tại tỉnh Bắc Giang năm 2018. Cặp mồi đặc hiệu được thiết kế dựa trên trình tự nucleotide trên ngân hàng gen thế giới (NCBI). Bằng phương pháp RT-PCR với các điều kiện tối ưu hóa, kết quả nghiên cứu cho thấy, virus dịch tả lợn cổ điển phát triển tốt trên môi trường tế bào PK15a trong DMEM bổ sung 5% huyết thanh bào thai bê. Giống virus được gây nhiễm trên môi trường tế bào theo hướng dẫn của tổ chức OIE. Phản ứng RT-PCR được thực hiện thành công với cặp mồi CSF324/326 ở nhiệt độ gắn mồi 50-60°C. Trình tự, gen ncE2 của virus dịch tả lợn được giải trình với độ dài 284bp, mã hóa 93 axít amin, độ tương đồng 99% so với chủng đã công bố trên ngân hàng gen NCBI. Kết quả nghiên cứu là cơ sở phân tích tính di truyền của virus dịch tả lợn cổ điển lưu hành tại Việt Nam. Từ khóa: Gen ncE2, lợn, Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction, virus dịch tả. ABSTRACT Detection of clasical swine fever virus base on ncE2 gene using Reverse Transcript- Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) The study aimed to application of Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction technique to diagnose clasical swine fever disease base on E2 of virus gene fragment. The virus strain used in this study was isolated from dead pigs in Bac Giang province in 2018. A pair of specific pri- mers were designed basing on nucleotide sequences on NCBI (National Center for Biotechnology Information). Through out RT-PCR with the optimal condition of reaction, the results showed that, clasical swine fever virus could grow on the PK15a cell medium in DMEM supplement 5% calve embryo serum. Virus strain was infected on the cells medium according to Organization of 1 Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang * Tác giả liên hệ: TS. Trần Đức Hoàn, Khoa Chăn nuôi - Thú y, Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang; Điện thoại: 0965 679 819; Email: dr.hoan288@gmail.com 20 KHKT Chăn nuôi số 267 - tháng 7 năm 2021 DI TRUYỀN - GIỐNG VẬT NUÔI International Epidemiology. RT-PCR reaction was successfully detected with the pair of primers CSF324/326 at the annealing temperature from 50-60°C. The seqencing of clasical swine fever virus ncE2 gene of this strain with 284bp, encoding 99 amino acids, similarity of 99% as compare with the published one in the Genebank. The results of the study is basic to analyze clasical swine fever virus genetic in Vietnam. Keywords: Gene ncE2, Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction, fever virus. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Pestivirus như BVDV, BDV..., kỹ thuật RT- PCR trở nên hữu ích với những đoạn gen Ngày nay, với những mô hình chăn nuôi như 5’NTR, E2, NS5B trong việc phân biệt quy mô công nghiệp ngày càng phát triển ...