Xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong bạch cầu cấp dòng tủy tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT). Nghiên cứu được tiến hành trên bệnh nhân BCCDT tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM từ ngày 01 tháng 03 năm 2010 đến 31 tháng 7 năm 2011.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong bạch cầu cấp dòng tủy tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí MinhNghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011XÁC ĐỊNH 4 TỔ HỢP GEN AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9TRONG BẠCH CẦU CẤP DÒNG TỦY TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁUHUYẾT HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHPhan Nguyễn Thanh Vân*, Nguyễn Tấn Bỉnh*, Nguyễn Thị Kim Định*, Phan Thị Xinh**TÓM TẮTMục tiêu nghiên cứu: Xác định 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 trongbạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT).Phương pháp nghiên cứu: Mô tả cắt ngang. Sử dụng phản ứng khuếch đại gen phiên mã ngược với mồithiết kế có thể phát hiện được tất cả các kiểu bản sao của mỗi tổ hợp gen. Nghiên cứu được tiến hành trên bệnhnhân BCCDT tại Bệnh viện Truyền máu Huyết học TP.HCM từ ngày 01 tháng 03 năm 2010 đến 31 tháng 7năm 2011.Kết quả: 19 bệnh nhân (BN) biểu hiện AML1/ETO (11,7%), 11 BN biểu hiện PML/RARA (6,8%), 7 BNbiểu hiện CBFB/MYH11 (4,3%), và 4 BN biểu hiện MLL/AF9 (2,5%), trong số 162 BN BCCDT.Kết luận: Kỹ thuật RT-PCR đơn giản, có độ nhạy cao nên được triển khai tại các cơ sở chuyên khoa Huyếthọc tại Việt Nam để giúp phát hiện nhanh các chuyển vị NST thường gặp không những trong BCCDT mà còntrong các bệnh lý máu ác tính khác.Từ khóa: Bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT), Phản ứng khuếch đại gen phiên mã ngược (RT-PCR: ReverseTranscriptase Polymerase Chain Reaction).ABSTRACTDETECTION OF 4 FUSION GENES: AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 IN ACUTEMYELOID LEUKEMIA PATIENTS AT BLOOD TRANSFUSION HEMATOLOGY HOSPITAL HO CHIMINH CITYPhan Nguyen Thanh Van, Nguyen Tan Binh, Nguyen Thi Kim Dinh, Phan Thi Xinh* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 4 - 2011: 498 - 502Objective: To detect 4 fusion genes AML1/ETO, PML/RARA, CBFB/MYH11, MLL/AF9 in AcuteMyeloid Leukemia (AML) patients.Method: Case series - descriptive research. Using RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction)with primer sets that can amplify all possible transcripts of each fusion gene. From March 01, 2010 to July 31,2011, we analysed Acute Myeloid Leukemia patients at Blood Transfusion Hematology Hospital.Results: 19 patients expressing AML1/ETO (11.7%), 11 patients expressing PML/RARA (6.8%), 7patients expressing CBFB/MYH11 4.3%), and 8 patients expressing MLL/AF9 (2.5%), among 162 newlydiagnosed patients with AML.Conclusion: RT-PCR is simple and highly sensitive technique that should apply to detect the frequentchromosome translocations not only in AML but also in other hematologic malignancies in hematology centers inVietnam.* Bệnh Viện Truyền Máu Huyết Học Thành Phố Hồ Chí Minh** Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí MinhTác giả liên lạc: ThS. BS. Phan Nguyễn Thanh VânĐT: 0919.691.770Email:vanntp@yahoo.com498Chuyên Đề Truyền Máu Huyết HọcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011Nghiên cứu Y họcKeywords: Acute Myeloid Leukemia (AML), Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR).ĐẶT VẤN ĐỀPhương phápCho đến nay, các bất thường về nhiễm sắcthể (NST) liên quan chặt chẽ với bệnh lý ác tínhhệ tạo máu và là chỉ điểm quan trọng trong việcchẩn đoán và tiên lượng bệnh(11). Khảo sátnhững bất thường về NST và đột biến gen lúcchẩn đoán là yếu tố tiên lượng độc lập đối vớiđáp ứng điều trị và thời gian sống còn của bệnhnhân (BN). Việc phân nhóm nguy cơ theo ditruyền tế bào khác nhau giữa nhóm BN trẻ tuổivà nhóm ≥ 60 tuổi và những bất thường NSTmắc phải hiện diện trong tế bào ung thư máucủa hầu hết bệnh nhân BCCDT.Mẫu máu hoặc mẫu tủy được ly trích RNAsử dụng Sepazol-I (Nacalai Tesque Inc., NhậtBản) theo qui trình kỹ thuật do công ty cungcấp. Sau khi ly trích RNA, cDNA được tổng hợpbằng cách sử dụng kít iScript cDNA synthesis(Công ty Biorad, Mỹ), tuân thủ qui trình kỹthuật của công ty.Một số chuyển vị NST tạo ra những tổ hợpgen đặc trưng trong bệnh BCCDT nhưAML1/ETO,PML/RARA,CBFB/MYH11,MLL/AF9 của 4 chuyển vị nhiễm sắc thểt(8;21)(q22;q22)(1,15,16,17),t(15;17)(q22;q11)(2,5,6,8),(4,7,13)inv(16)(p13;q22), và t(9;11)(p21-22;q23)(3,10,14),tương ứng.Từ đầu năm 2010 đến nay, Bệnh viện Truyềnmáu Huyết học TP. HCM đã sử dụng phươngpháp RT-PCR để khảo sát bộ 4 tổ hợp genthường gặp là AML1/ETO, PML/RARA,CBFB/MYH11, MLL/AF9 trong BCCDT ngay lúcchẩn đoán. Với phương pháp này, kết quả sẽđược xác định trong vòng 1 tuần góp phần phânnhóm tiên lượng vào ngày thứ 8 của phác đồđiều trị, giúp lựa chọn hướng điều trị phù hợpcho từng bệnh nhân.ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUThiết kế nghiên cứuThành phần phản ứng PCR gồm có 1 μLcDNA được trộn với 0,1 μL (0,5 U) iTaqPolymerase (Biorad), 1 μL (10 pmol) cặp mồixuôi và ngược trong 20 μL hỗn hợp. Để khuếchđại bộ 4 tổ hợp gen AML1/ETO, PML/RARA,CBFB/MYH11, MLL/AF9, 4 mồi cho mỗi tổ hợpgen được sử dụng. Riêng đối với những tổ hợpgen cần được khảo sát qua hai giai đoạn thìphản ứng PCR lần thứ hai s ...