Xác định chỉ thị phân tử cho đậu đỗ

Về nguyên lý, kỹ thuật RFLP dựa trên thực tế của sự biến dị và tái tổ hợp tự nhiên trong bộ gen ADN là nguyên nhân vài vị trí enzyme cắt giới hạn bị mất, được tạo ra hay được sắp xếp lại(6). Điều này dẩn đến khi sợi ADN bị cắt thành nhiều đoạn nhỏ bởi các enzym hạn chế thì giữa các giống/loài sẽ có những phân đoạn khác nhau về kích thước hay chiều dài.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xác định chỉ thị phân tử cho đậu đỗ ViÖn khoa häc vµ c«ng nghÖ viÖt nam ViÖn c«ng nghÖ sinh häcB¸o c¸o kÕt qu¶ nghiªn cøu 2001-2004 ®Ò tµi nh¸nhX¸c ®Þnh chØ thÞ ph©n tö cho ®Ëu ®ç Thuéc ®Ò tµi KC.04.08 Chñ nhiÖm ®Ò tµi nh¸nh: TS. TrÇn ThÞ Ph−¬ng Liªn C¬ quan thùc hiÖn: ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc, ViÖn Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖt Nam Hµ Néi 2004 1 B¸o c¸o tæng kÕt 2001-2004 ®Ò tµi nh¸nh: “x¸c ®Þnh chØ thÞ ph©n tñ cho ®Ëu ®ç”Tªn ®Ò tµi :”Nghiªn cøu sö dông c«ng nghÖ tÕ bµo vµ kü thuËt chØ thÞ ph©n tö phôc vô chän t¹o gièng c©y trång “M· sè : KC 04-08.Chñ nhiÖm : psg.tskh. Lª ThÞ MuéiC¬ quan thùc hiÖn: ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc, ViÖn Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖt NamTªn ®Ò tµi nh¸nh : X¸c ®Þnh chØ thÞ ph©n tö cho ®Ëu ®çChñ nhiÖm ®Ò tµi nh¸nh: TS. TrÇn ThÞ Ph−¬ng LiªnC¬ quan thùc hiÖn : ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc, ViÖn Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖt Nam2. C¸n bé tham gia:- TS N«ng V¨n H¶i - ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc- TS TrÇn ThÞ Ph−¬ng Liªn- ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc- ThS Huúnh ThÞ Thu HuÖ – ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc- CN L−¬ng ThÞ Thu H−êng- ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc vµ ctv.3. Thêi gian thùc hiÖn: Tõ 11-2001 ®Õn 2004 21. Môc ®Ých : ThiÕt lËp c¸c chØ thÞ ph©n tö h÷u hiÖu ®Ó chän t¹o c¸c dßng ®Ëu ®ç cã n¨ngsuÊt cao, phÈm chÊt tèt, chèng chÞu s©u bÖnh vµ ®iÒu kiÖn bÊt lîi.2. Néi dung ®¨ng ký nghiªn cøu:- Khai th¸c c¸c chØ thÞ ph©n tö liªn quan ®Õn tÝnh kh¸ng bÖnh rØ s¾t, chÞu h¹n tõ c¸c ng©n hµng gen quèc tÕ nh− EMBL/Genbank/DDBJ.- ThiÕt kÕ c¸c måi ngÉu nhiªn RAPD vµ SSR ®Ó t×m kiÕm c¸c dßng gièng kh¸ng bÖnh trong tËp ®oµn ®Ëu tu¬ng ViÖt Nam.- §¸nh gi¸ tuyÓn chän c¸c tæ hîp lai theo ®Þnh h−íng tÝnh kh¸ng bÖnh vµ chÞu h¹n. §¸nh gi¸ sím tÝnh chÞu h¹n vµ kh¸ng bÖnh ë c¸c thÕ hÖ F2,F3 b»ng chØ thÞ ph©n tö. 33. §Æt vÊn ®Ò: §Ëu t−¬ng lµ c©y trång truyÒn thèng l©u ®êi ë n−íc ta. Do nhu cÇu sö dông®Ëu t−¬ng còng nh− c¸c s¶n phÈm cña chóng ngµy cµng t¨ng nªn viÖc chän gièngvµ s¶n xuÊt ®Ëu t−¬ng trªn thÕ giíi còng nh− ë n−íc ta ®· ®−îc thóc ®Èy m¹nh mÏ(Ng« ThÕ D©n et al., 2000). Thµnh tùu gÇn ®©y nhÊt lµ viÖc thiÕt lËp ®−îc b¶n ®åliªn kÕt gen ë ®Ëu t−¬ng trªn c¬ së kÕt hîp c¸c tÝnh tr¹ng h×nh th¸i sinh lý truyÒnthèng vµ ®Æc biÖt lµ c¸c chØ thÞ ph©n tö (RFLP-Restriction fragment lengthpolymorphism, RAPD- Random amplified polymorphism DNA, AFLP- Amplifiedfragment length polymorohism, SSR- simple sequence repeat…) (Cregan et al.,1999). NhiÒu QTL (quantitative trait loci - locus tÝnh tr¹ng sè l−îng) ®· ®−îcnghiªn cøu dùa trªn b¶n ®å nµy. Mét trong nh÷ng chØ thÞ ph©n tö thµnh c«ng nhÊt ë®Ëu t−¬ng lµ chØ thÞ SSR (simple sequence repeats – tr×nh tù lÆp l¹i ®¬n gi¶n). SSRlµ ®o¹n DNA ë genome hoÆc lôc l¹p, mµ trong ®ã, tr×nh tù tõ 1-6 bp lÆp l¹i víi tÇnsè tõ 10-60 lÇn vµ tÇn sè nµy ®−îc di truyÒn theo Mendel nh− tÝnh tr¹ng ®ång tréi.Nhê cã c¸c tr×nh tù b¶o thñ giíi h¹n ë hai ®Çu cña ®o¹n tr×nh tù lÆp l¹i nµy mµchóng ®−îc nh©n lªn b»ng PCR vµ x¸c ®Þnh trªn ®iÖn di c¸c allele SSR. Ngµy nay,c¸c nhµ khoa häc ®· ph¸t hiÖn ®−îc trªn 600 chØ thÞ SSR trong 20 nhãm liªn kÕt ë®Ëu t−¬ng. ChØ thÞ SSR cho ®é ®a h×nh rÊt cao ë ®Ëu t−¬ng nªn ®−îc sö dông ®Ónghiªn cøu ®a d¹ng sinh häc, sù liªn kÕt c¸c tÝnh tr¹ng sè l−îng nh− chÞu h¹n,phÈm chÊt h¹t,… nh»m môc ®Ých chän gièng c©y trång. Nghiªn cøu chän t¹o gièng ®−îc tiÕn hµnh nhiÒu n¨m nay. Tuy nhiªn vÊn ®Òchän t¹o bé gièng ®Ëu t−¬ng phï hîp víi c¸c vïng sinh th¸i n−íc ta lµ rÊt cÊp b¸ch.NhÊt lµ khi n−íc ta kh«ng chØ cã nhiÒu vïng ®Þa h×nh khÝ hËu kh¸c nhau mµ cßnhay s¶y ra b·o lôt, giã mïa, nãng, h¹n kÐo dµi. ViÖc chän gièng dùa trªn c¸c chØtiªu sinh lý n«ng häc th−êng ®ßi hái thêi gian gÇn 10 n¨m mµ c¸c gièng vÉn kh«ngbiÕt ®−îc t−êng tËn vÒ b¶n chÊt di truyÒn. V× vËy, xuÊt ph¸t tõ yªu cÇu thùc tÕ, chóng t«i kÕt hîp víi Trung t©m nghiªncøu vµ thùc nghiÖm ®Ëu ®ç, tiÕn hµnh mét nhµnh trong ®Ò tµi KC04.08: “X¸c ®Þnh 4chØ thÞ ph©n tö cho ®Ëu ®ç” víi môc ®Ých chän läc vµ thiÕt lËp ®−îc c¸c chØ thÞ ph©ntö cho c¸c tÝnh tr¹ng cÇn thiÕt nh− chÞu h¹n… ®Ó t¹o gièng ®Ëu t−¬ng cã n¨ng xuÊtcao, phÈm chÊt tèt chèng chÞu s©u bÖnh … thÝch hîp víi vóng ®Þa h×nh khÝ hËukh¸c nhau ë n−íc ta.4. nguyªn liÖu vµ ph−¬ng ph¸p:Nguyªn liÖu: Nguyªn liÖu bao gåm c¸c gièng ®Ëu t−¬ng vµ c¸c tæ hîp lai do Trung t©mNghiªn cøu vµ Thùc nghiÖm ®Ëu ®ç (TTNCvµ TN §Ëu ®ç) cung cÊp theo tiÕn ®écïng thùc hiÖn ®Ò tµi KC04-08. (§Ò tµi nh¸nh cña ®Ò tµi KC04.08 do TS TrÇn ThÞTr−êng chñ nhiÖm) §ã lµ b¶y gièng ®Ëu t−¬ng : Cóc Vµng, §T12, §T80, §T2000, VX91, V74,CM60 ®−îc chän lµm nguyªn liÖu khëi ®Çu ®Ó t¹o gièng chÞu h¹n, kh¸ng bÖnh g ...