XÁC ĐỊNH NITROGEN TOÀN PHẦN CỦA VẮC XIN VÀ SINH PHẨM BẰNG THUỐC THỬ NESSLER

Phương pháp dựa vào tính chất của thuốc thử Nessler cho phản ứng màu với ion amoni (NH4+) được tạo thành sau khi vô cơ hoá các chất protein. Phương pháp tiến hành a. Chuẩn bị mẫu thử: Cho 0,2 ml chế phẩm và 0,2 ml dung dịch acid sulfuric đậm đặc vào một ống thuỷ tinh và đem đốt trên bếp cát. Để tăng tốc độ phản ứng thỉnh thoảng cho vài giọt dung dịch oxy già (H2O2) đậm đặc vào ống đốt sau khi làm nguội. Khi chế phẩm đã được vô cơ hoá hoàn toàn, dung...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
XÁC ĐỊNH NITROGEN TOÀN PHẦN CỦA VẮC XIN VÀ SINH PHẨM BẰNG THUỐC THỬ NESSLER XÁC ĐỊNH NITROGEN TOÀN PHẦN CỦA VẮC XIN VÀ SINH PHẨM BẰNG THUỐC THỬ NESSLERNguyên lýPhương pháp dựa vào tính chất của thuốc thử Nessler cho phản ứng màu với ionamoni (NH4+) được tạo thành sau khi vô cơ hoá các chất protein.Phương pháp tiến hànha . Chu ẩn bị mẫu thử:Cho 0,2 ml chế phẩm và 0,2 ml dung dịch acid sulfuric đậm đặc vào một ống thuỷtinh và đem đốt trên bếp cát. Để tăng tốc độ phản ứng thỉnh thoảng cho vài giọt dungdịch oxy già (H2O2) đậm đặc vào ống đốt sau khi làm nguội. Khi chế phẩm đã đượcvô cơ hoá hoàn toàn, dung dịch mất màu, cho nước cất vào đủ 10ml thu được dungdịch A.Lấy 1ml dung dịch A vào ống nghiệm, thêm 8,5 ml nước cất và 0,5 ml thuốc thửNessler, được mẫu thử.b . Song song tiến hành làm mẫu trắng gồm: 9,5 ml nước cất và 0,5 ml thuốc thửNessler.c. Song song tiến hành dựng đường chuẩn:Hút dung dịch amoni sulfat chuẩn có hàm lượng 0,05 mg nitrogen/ml vào các ốngnghiệm theo thứ tự sau: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; và 0,7 ml. Cho nước cất vừa đủ9,5 ml và 0,5ml thuốc thử Nessler.Lắc đều các ống nghiệm.Đo quang phổ bước sóng 420nm.Vẽ đường cong chuẩn.Lượng protein toàn phần trong chế phẩm được tính theo công thức sau: ax6,25 x10 x100 X ( g %)   ax0,03125 1,0 x0,2 x1000000Trong đó: Lượng nitơ tìm được trên đường chuẩn ( g).a: Hệ số chuyển đổi nitơ thành protein.6,25: Độ pha loãng dung dịch vô cơ hóa.10: Chuyển thành phần trăm.100: Lượng mẫu thử đem so màu (ml).1,0: Lượng mẫu thử đem vô cơ hóa (ml).0,2: Hệ số chuyển g thành g.1000000:Cách pha dung dịch amoni sulfat chuẩn có hàm lượng nitơ 0,05mg/mlCân 0,2375 g amoni sulfat (đã được sấy khô trong bình hút ẩm bằng silicagel đếntrọng lượng không đổi), hoà tan vào vừa đủ 500ml nước cất. Dung dịch vừa pha cóhàm lượng nitrogen là 0,1mg/ml, trước khi dùng pha loãng 2 lần bằng nước cất.Tiêu chuẩn cho phépHàm lượng nitrogen toàn phần trong vắcxin và sinh phẩm tùy theo yêu cầu đối vớitừng loại mẫu thử.