Xây dựng qui trình định lượng carotenoid trong một số chế phẩm đang lưu hành trên thị trường

Trong đề tài này nhằm nghiên cứu quy trình chiết tách carotenoid từ vi khuẩn và xây dựng quy trình định lượng carotenoid cho các chế phẩm đang lưu hành bằng phương pháp HPLC với hệ thống knauer smarline 2500 system.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng qui trình định lượng carotenoid trong một số chế phẩm đang lưu hành trên thị trường Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014 XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CAROTENOID TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM ĐANG LƯU HÀNH TRÊN THỊ TRƯỜNG Võ Xuân Hoài*, Phan Thanh Dũng*, Trần Cát Đông* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Trên thị trường hiện nay có rất nhiều chế phẩm giàu carotenoid đang lưu hành như: carotenoid từ thực vật (cà rốt, gấc, cà chua), tảo và gần đây là từ vi khuẩn, tuy nhiên trong nước chưa có quy trình định lượng cụ thể cho các chế phẩm này. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Trong đề tài này chúng tôi nghiên cứu quy trình chiết tách carotenoid từ vi khuẩn và xây dựng quy trình định lượng carotenoid cho các chế phẩm đang lưu hành bằng phương pháp HPLC với hệ thống Knauer Smarline 2500 system. Kết quả và bàn luận: Kết quả nghiên cứu cho thấy, phá vỡ tế bào bằng tán trong bể siêu âm và chiết carotenoid với chloroform - methanol (2:1) cho hiệu quả chiết tách carotenoid từ vi khuẩn cao nhất (94,82%). Hàm lượng carotenoid từ vi khuẩn và các chế phẩm được xác định bởi phương pháp HPLC nhanh chóng và có độ nhạy cao, trên cột RP C18 ở nhiệt độ phòng, hệ dung môi pha động là acetonitril- methanol - dichloromethal (70:20:10, tt/tt/tt) bổ sung amonium acetat 10 mM với tốc độ dòng 1ml /phút, thể tích tiêm 20 μl, bước sóng phát hiện tại 450 nm. Phương pháp HPLC cho tương thích cao với các thông số sắc ký có RSD < 2%. Phương pháp được thẩm định cho độ chính xác và độ đúng thích hợp với tỷ lệ phục hồi của carotenoid từ chế phẩm đạt 99,83%. Kết luận: Chúng tôi đã xây dựng thành công trình định lượng bằng kỹ thuật HPLC để kiểm tra hàm lượng carotenoid trong các chế phẩm đang lưu hành trên thị trường. Qui trình được thẩm định và áp dụng thành công trên một số sinh khối vi khuẩn giàu carotenoid và chế phẩm chứa carotenoid trong nước và ngoại nhập. Từ khóa: HPLC, carotenoid, betacaroten, thực phẩm chức năng, ABSTRACT ESTABLISHMENT OF A METHOD FOR CAROTENOIDS QUANTIFICATION IN SOME COMMERCIAL PRODUCTS USING HPLC METHOD Vo Xuan Hoai, Phan Thanh Dung, Tran Cat Dong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - Supplement of No 2 - 2014: 182 - 187 Introduction: Nowadays, there are many rich carotenoid products on the market. Carotenoids in these products come from plants: carrot, gac fruit (Momordica cochinchinensis), tomato, seaweed and recently from bacteria. Although they are popularly used but the suitable quantity method is not yet available for these products in Vietnam. Materials and methods: In this work, we studied methods for extraction of carotenoid from bacteria and developed the carotenoid quantitative method for products containing carotenoid based on HPLC with Knauer Smarline 2500 system. Results and disscussions: The result show that, cells breaking process by using ultrasonic bath and extract carotenoid with chloroform/methanol (2:1) are the most effective with performance about 94,82%. The content of carotenoids from bacteria and other products were determined by HPLC method, that is rapid and high sensitivity with RP C18, at room temperature. The mobile phase is acetonitrile – methanol - dichloromethal (70:20:10, v/v/v) * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS. Phan Thanh Dũng ĐT: 0983957158 182 Email: dungpharm@yahoo.com Chuyên Đề Dược Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 2 * 2014 Nghiên cứu Y học supplemented with ammonium acetate 10 mM, with flow 1ml/minute, inject volume 20 μl, UV detector at 450 nm. The HPLC method is highly suitable with RSD of chromatography parameters were less than 2%. The method was validated for the acceptable accuracy and precision with the recovery rate is 99.83%. Conclusion: We have succesfully established an HPLC protocol for qualification of carotenoid in commercial products. The protocol has been validated and applied to determining the carotenoid contents of several different bacterial biomasses and some domestic and imported products. Keywords: HPLC, carotenoid. Betacarotene, functional food DD1.1, Bacillus indicus HU36, Bacillus infantis ĐẶT VẤN ĐỀ AT14, độ ẩm 5%, mật độ tế bào 1010 CFU/g sinh Carotenoid là nhóm sắc tố terpenoid phổ khối, được cung cấp từ Phòng thí nghiệm Vi biến trong tự nhiên, nhất là trong các sinh vật sinh Công nghệ Dược – Khoa Dược – ĐH Y sống được dưới ánh nắng mặt trời bao gồm thực Dược TP HCM, 41 Đinh Tiên Hoàng Q1. vật, động vật, vi khuẩn, tảo, nấm…(3). Kể từ khi Các chế phẩm chứa carotenoid trên thị được phát hiện cho đến nay, carotenoid được trường: Dầu gấc Vinaga (Số lô 4306, hạn sử ứng dụng rộng rãi để làm phụ gia tạo màu cho dụng 6/2013), dầu gấc Gấc Việt Nam (Số lô thực phẩm, bổ sung những chất dinh dưỡng, 4609, hạn sử dụng 6/2013), Super Antioxidant giúp gia tăng giá trị thẩm mỹ cho cho ngành của Holland & Barrett (Số lô 375324, hạn sử thủy sản (7). Bên cạnh đó, nhiều nghiên cứu dịch dụng 1/2015), Mỹ, Beta-Carotene của Holland tễ học và kết q ...