Xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời HPV (human papilloma virus) và lậu cầu khuẩn (neisseria gonorrhoeae)

Đề tài nghiên cứu trình bày về việc xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời hai tác nhân gây bệnh HPV và neisseriagonorrhoeae có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán và điều trị, đồng thời cũng sẽ góp phần giảm thiểu tối đa chi phí trong sàng lọc các bệnh nhiễm ở đường sinh dục.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời HPV (human papilloma virus) và lậu cầu khuẩn (neisseria gonorrhoeae)Nghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011XÂY DỰNG QUI TRÌNH MULTIPLEX PCR PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HPV(HUMAN PAPILLOMA VIRUS) VÀ LẬU CẦU KHUẨN(NEISSERIA GONORRHOEAE)Trần Đăng Thắng*,**, Nguyễn Văn Trương*, Hồ Thị Thanh Thủy***, Nguyễn Thúy Hương**TÓM TẮTViệc xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời hai tác nhân gây bệnh HPV và Neisseriagonorrhoeae có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán và điều trị, đồng thời cũng sẽ góp phần giảm thiểu tối đa chiphí trong sàng lọc các bệnh nhiễm ở đường sinh dục.Phương pháp: Hệ mồi được chúng tôi xây dựng dựa trên dữ liệu trình tự gien của HPV và Neisseriagonorrhoeae đã được công bố trên NCBI và khảo sát những điều kiện tối ưu cho việc xây dựng qui trìnhmultiplex PCR phát hiện đồng thời HPV và Neisseria gonorrhoeaeKết quả: Hai cặp mồi chúng tôi thiết kế cho quy trình là hoàn toàn đặc hiệu với các trình tự mục tiêu, cóhiệu quả nhân bản cao và độ nhạy hai cặp mồi có nồng độ ngưỡng mà phương pháp có thể xác định được đồngthời cả hai tác nhân gây bệnh này là 2 x 103 copies/ml. Và thử nghiệm được thực hiện trên 30 mẫu bệnh thu nhậnở Bệnh viện Hùng Vương, Bệnh Viện Da Liễu có 7 mẫu dương trong đó 4 mẫu dương với HPV (13%), 2 mẫudương tính với Neisseria gonorrhoeae (6%) và 1 mẫu đồng nhiễm HPV với Neisseria gonorrhoeae (3%).Kết luận: Từ kết quả trên, chúng tôi kết luận đã xây dựng thành công quy trình Multiplex –PCR phát hiệnđồng thời thời hai tác nhân gây bệnh HPV và Neisseria gonorrhoeae.Từ khóa: multiplex PCR, Human Papilloma Virus, Neisseria gonorrhoeae.ABSTRACTESTABLISHMENT OF MULTIPLEX PCR ASSAY FOR SIMULTANEOUS DETECTION OFHUMANPAPILLOMA VIRUS AND NEISSERIA GONORRHOEAETran Đang Thang, Nguyen Van Truong, Ho Thi Thanh Thuy, Nguyen Thuy Huong* Y hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 – No. 3 – 2011: 172 - 176Objective: The process construction of multiplex PCR for simultaneous detection of two pathogensNeisseria gonorrhoeae and HPV has important implications for diagnosis and treatment, and will also contributeto minimize the cost of screening genital tract infections.Method: Primers were designed basing on the sequence database of HPV and Neisseria gonorrhoeae (NCBI)and we examined optimal conditions for the assay in order to simultaneously detect HPV and Neisseriagonorrhoeae.Results: Two primer pairs showed completely specific to the target with a high sensitivity that approachedthe threshold which could be determined at 2 x 103 copies / ml. We have tested these primers on 30 samplescollected at Hung Vuong Hospital, and Dermato-Venereological Hospital. There were seven positive samples: foursamples (13%) positive with HPV, two samples (6%) positive with Neisseria gonorrhoeae and one sample (3%)positive with HPV and Neisseria gonorrhoeae.Conclusions: Given such results, we have successfully built a Multiplex-PCR assay for simultaneousBệnh viện Hùng Vương *, Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Đại Học Bách Khoa **, Công ty cổ phần Việt Á***Tác giả liên lạc: CN. Trần Đăng Thắng ĐT: 0908212026Email: thangxnhv@yahoo.com174Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011Nghiên cứu Y họcdetection of Neisseria gonorrhoeae and HPV.Key words: multiplex PCR, Human Papilloma Virus, Neisseria gonorrhoeae.thể được ứng dụng hỗ trợ trong chẩn đoán vàĐẶT VẤN ĐỀđiều trị, sẽ rất tiện lợi cho việc phát hiện hai tácHiện tại, theo ước tính, Việt Nam có khoảngnhân gây bệnh ở đường sinh dục người, cũng800.000 đến 1.000.000 người mắc các bệnh nhiễmnhư góp phần giảm thiểu chi phí trong sàng lọctrùng lây qua đường sinh dục mỗi năm. Trongcác bệnh nhiễm ở đường sinh dục.đó, HPV và Neisseria gonorrhoeae ngày càng đượcVẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPđặc biệt quan tâm. Các bệnh này có thể gây ranhững hậu quả nghiêm trọng như: Vô sinh, lâyMẫutruyền sang con (khi người phụ nữ có thai),Đối chứng dương DNA vi khuẩn N.hoặc có thể dẫn đến tử vong.gonorrhoeae được cung cấp từ Trung Tâm KiểmTrước đây, việc chẩn đoán các bệnh HPVChuẩn Xét Nghiệm Thành Phố (75a Cao Thắng,và Neisseria gonorrhoeae chủ yếu bằng cácPhường 3, Quận 3, TP.HCM) có nồng độ DNAphương pháp truyền thống, như là phươngmẫu là 3.107 copies/ml và đối chứng dương HPVpháp miễn dịch đối với HPV (Human Papillomacó nồng độ là 3.107 copies/ml được cung cấp từVirus) và phương pháp nuôi cấy đối vớiBệnh Viện Hùng Vương.Neisseria gonorrhoeae, nhưng các phương phápBa mươi mẫu phết âm đạo và dịch mủ bộnày không đủ nhạy, thời gian kéo dài và tỏ raphận sinh dục được thu thập từ Viện Da Liễu,kém hiệu quả.Bệnh Viện Hùng Vương.Hiện tại, trên thế giới cũng như ở Việt Nam,kit PCR phát hiện cùng lúc C. trachomatis vàNeisseria gonorrhoeae đã được thương mại hóa.Trái lại, kit phát hiện phát hiện đồng thời HPVvà Neisseria gonorrhoeae cũng có tiềm năng,nhưng hiện tại ở Viêt Nam chưa có kit phát hiệnđồng thời hai tác nhân này. V ...