Xây dựng quy trình định lượng polysacharid trong cao mã đề bằng phương pháp đo quang

Nghiên cứu trình bày về: Mã đề plantago major L. được sử dụng với nhiều mục đích trong Y học cổ truyền trên toàn thế giới. Tuy vậy, cho đến nay tại Việt Nam, việc sử dụng cao Mã ñề trong các chế phẩm trị liệu còn rất hạn chế, một phần có thể do cao mã đề chưa có tiêu chuẩn xây dựng để định lượng. Xây dựng phương pháp định lượng polysaccharid toàn phần bằng phương pháp so màu, sử dụng acid D (+) galacturonic làm chất chuẩn.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình định lượng polysacharid trong cao mã đề bằng phương pháp đo quangXÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG POLYSACHARID TRONG CAO MÃ ĐỀ BẰNGPHƯƠNG PHÁP ĐO QUANGLê Thị Lan Phương∗, Lâm Ngọc Thọ∗∗, Nguyễn Ngọc Khôi**TÓM TẮTMục tiêu nghiên cứu: Mã ñề Plantago major L. ñược sử dụng với nhiều mục ñích trong Y học cổ truyềntrên toàn thế giới. Tuy vậy, cho ñến nay tại Việt Nam, việc sử dụng cao Mã ñề trong các chế phẩm trị liệu cònrất hạn chế, một phần có thể do cao Mã ñề chưa có tiêu chuẩn xây dựng ñể ñịnh lượng.Xây dựng phương pháp ñịnh lượng polysaccharid toàn phần bằng phương pháp so màu, sử dụng acid D(+) galacturonic làm chất chuẩn.Phương pháp: Polysaccharid ñược chiết từ cao toàn phần bằng nước nóng, sau ñó làm tủapolysaccharid bằng ethanol 95%. Tủa này cho phản ứng với dung dịch 0,2% anthron/H2SO4 ñậm ñặc. Sauñó hòa tan trong ethanol 95%. Đo sản phẩm tạo thành bằng máy ño quang phổ UV-Vis ở cực ñại hấp thu422 nm. Phản ứng ñược thực hiện song song với acid D (+) galacturonic chuẩn.Kết quả: Kết quả thẩm ñịnh qui trình cho thấy có thể ứng dụng ñể ñịnh lượng polysaccharid trong caochiết mã ñề.Kết luận: Xây dựng và thẩm ñịnh qui trình ñịnh lượng polysaccharid toàn phần trong cao mã ñề, sửdụng acid D (+) galacturonic làm chất chuẩn.Từ khóa: Mã ñề Plantago major L., polysaccharid, acid D (+) galacturonic.ABSTRACTQUANTITATIVE ANALYSIS OF POLYSACCHARIDES FROMPLANTAGO MAJOR EXTRACTLe Thi Lan Phuong, Lam Ngoc Tho, Nguyen Ngoc KhoiBackground and aims: Plantago major L. has been used as a medicinal material for many years. Thebiological activity of this type of plant material is due to a complex of biologically active compounds inwhich the polysaccharides are particularly noteworthy. The present study was undertaken to develop andvalidate quantitative method for analysis the total content of polysaccharides in Plantago major extracts.Methods: The polysaccharides from P. major extracts were developed by Dreywood method, convertedto galacturonic acid.Results: This quantitative determination is inexpensive, simple, sensitive, and reproducible.Conclusion: This method is appliable to determine the polysaccharide content of Plantago majorextracts.Key words: Plantago major L., polysaccharide, D (+) galacturonic acid, quantitative analysisĐẶT VẤN ĐỀMã ñề Plantago major L. ñược sử dụng với nhiều mục ñích trong Y học cổ truyền trên toàn thế giới nhưcó tác dụng tốt ñối với bệnh lao, ung thư và ñặc biệt ñối với các thể nặng của loét dạ dày. Cao chiết từ lá khôcó tác dụng kích thích sự tái sinh tất cả các lớp của da, tác dụng lợi tiểu, làm tăng lượng nước tiểu, ure, aciduric và muối trong nước tiểu. Cao cồn có tác dụng bảo vệ gan rõ rệt ñối với tổn thương gan gây bởi CCl4trên ñộng vật. Hoạt chất aucubin phân lập từ hạt mã ñề có tác dụng bảo vệ gan và chống ngộ ñộc nấmAmanita [1],[3],[5],[6].Tuy vậy, cho ñến nay tại Việt Nam, việc sử dụng cao mã ñề trong các chế phẩm có mụcñích trị liệu còn rất hạn chế, một phần là do cao mã ñề chưa có tiêu chuẩn xây dựng ñể ñịnh lượng. Trongnghiên cứu này, chúng tôi xây dựng phương pháp ñịnh lượng polysaccharid toàn phần bằng phương pháp somàu sử dụng acid D (+) galacturonic làm chất chuẩn theo phương pháp của D. N. Olennikov [4].NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUHóa chất, dung môi:Dung môi sử dụng chiết xuất là loại dược dụng, dung môi và hóa chất dùng trong phân tích, ñịnh lượngdùng loại PA (Pure Analysis) hoặc AR (Analysis Reagent): anthron PA (Merck), acid sulfuric PA, acidhydrocloric PA (Prolabo), acid D (+) galacturonic PA (Fluka-Slovakia), ethanol PA (Merck),Thiết bị:Máy ño quang phổ UV-Vis Hitachi U-1900, máy ly tâm Sigma∗Khoa Y học Cổ Truyền- Đại học Y Dược Tp. HCMKhoa Dược – Đại học y Dược Tp. HCMĐịa chỉ liên hệ: DS. Lê Thị Lan PhươngĐT:0907748591∗∗Email: lanphuongd04@yahoo.com147Cao chiết Mã ñề:Thu mua Mã ñề còn tươi vào tháng 03/2009 tại chợ Nguyễn Văn Trỗi, loại bỏ những thân, lá bị sâubệnh, rửa sạch, bỏ rễ, phơi âm can và xay thô. Bột Mã ñề sau ñó ñược ngấm kiệt bằng cồn 50% với tỷ lệdung môi: dược liệu là 10:1. Tất cả dịch chiết sau ñó ñược cô cách thủy ñến khi ñược cao chiết với ñộ ẩm12,43%, hiệu suất chiết sau khi ñã trừ ẩm là 20%.Phương pháp xử lý mẫu:Cân chính xác khoảng 1 g cao cho vào cốc có mỏ, thêm 30 ml nước nóng. Đun cách thủy trong 1 giờ,làm lạnh. Lọc vào bình ñịnh mức 50 ml. Thêm khoảng 20 ml nước nóng và chiết thêm 1 lần nữa trong ñiềukiện tương tự. Bổ sung nước cho tới vạch (dung dịch A).Lấy 2 ml dung dịch A, thêm 4 ml ethanol 95%, khuấy ñều và cách thủy 10 phút. Sau ñó ñể nguội và lytâm 3000 vòng/10 phút. Gạn bỏ dịch. Thêm vào tủa 5 ml ethanol 95%, tiến hành các bước tương tự như trên.Sau khi ly tâm bỏ dịch, dùng hơi nóng loại bỏ vết của ethanol. Thêm 4 ml dung dịch 0,2% anthron/H2SO4ñậm ñặc, ñem cách thủy hỗn hợp phản ứng trong 10 phút. Để nguội, cho vào bình ñịnh mức 25 ml, bổ sungethanol 95% ñến vạch (dung dịch B).Mẫu chuẩn ñược thực hiện ñ ...