Xây dựng quy trình giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin ở bệnh nhân mắc bệnh loạn dưỡng cơ duchenne

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm xây dựng quy trình giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin ở bệnh nhân mắc bệnh loạn dưỡng cơ duchenne. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Xây dựng quy trình giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin ở bệnh nhân mắc bệnh loạn dưỡng cơ duchenneNghiêncứuYhọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập18*PhụbảncủaSố1*2014XÂYDỰNGQUYTRÌNHGIẢITRÌNHTỰXÁCĐỊNHĐỘTBIẾNĐIỂMCỦAGENDYSTROPHINỞBỆNHNHÂNMẮCBỆNHLOẠNDƯỠNGCƠDUCHENNENguyễnThịBăngSương*TÓMTẮTĐặtvấnđề:LoạndưỡngcơDuchenne(DMD:Duchennemusculardystrophy)làbệnhditruyềnlặnliênkếtgiớitínhX,gâynênbởiđộtbiếngendystrophin.Dạngđộtbiếnphổbiếnnhấtlàđộtbiếnxóađoạngen,chiếmtỷlệ60‐65%.Độtbiếnđiểmđứngthứhaivềmứcđộthườnggặp,chiếm20‐30%.Độtbiếnlặpđoạn,khoảng10‐15%.ViệcpháthiệnđộtbiếnđiểmchưađượcthựchiệnrộngrãitạiViệtNamdokhókhăntrongviệcxâydựngquytrìnhchẩnđoán.Mụctiêu:XâydựngquytrìnhgiảitrìnhtựpháthiệnđộtbiếnđiểmcủagendystrophinĐối tượng và phương pháp nghiên cứu: HaigiađìnhbệnhnhânmắcbệnhDMD,haibệnhnhânnàyđược phân tích gen dystrophin bằng kỹ thuật MLPA nhưng không có đột biến mất đoạn và lặp đoạn gendystrophin. Ly trích DNA của hai bệnh nhân cùng hai người mẹ, tiến hành giải trình tự trực tiếp gendystrophinđểpháthiệnđộtbiếnđiểm.Kếtquả:Mộtbệnhnhânbịđộtbiếntạivịtríp.E2468X,mộtbệnhnhânđộtbiếndạngp.N2414fr*X2425.Kếtluận:Xâydựngthànhcôngquytrìnhgiảitrìnhtựđểxácđịnhđộtbiếnđiểmcủagendystrophin,đâylàtiềnđềgiúpứngdụngxácđịnhbảnđồđộtbiếngendystrophintrêncácbệnhnhânloạndưỡngcơDuchennetạiViệtNam.Từkhóa:DMD,loạndưỡngcơDuchenne,dystrophin,độtbiếnđiểmABSTRACTESTABLISHSEQUENCINGPROCEDURETOIDENTIFYDYSTROPHINGENEPOINTMUTATIONCAUSINGDUCHENEMUSCULARDYSTROPHYNguyenThiBangSuong*YHocTP.HoChiMinh*Vol.18‐SupplementofNo1‐2014:508‐513Introduction: Duchenne muscular dystrophy(DMD) is a recessiveX‐linkedform ofmuscular dystrophycausedbymutationsondystrophingene.DMDdiseaseresultsinmuscledegenerationandeventualdeath.Themostcommondyptrosingenemutationisdeletion,accountingfor60‐65%.Pointmutationisthesecondcommonmutationwhichaccountingfor20‐30%.Duplicationattributesabout10‐15%mutations.ThedetectionofpointmutationshasnotbeenwidelyappliedinVietnambecauseofdifficultiesinestablishingdiagnosticprocedures.Objective:Establishdiagnosisproceduretoidentifypointmutationsondystrophingene.PatientsandMethods:TwoDMDpatientswhosedystrophingeneswereanalyzedbyMLPAmethodbutno deletion or duplication mutants were identified. The DNA of these two patients and their mothers weresequencedtofoundpointmutants.Results:Onepatientcarriesp.E2468Xmutant,theotherpatienthavep.N2414fr*X2425mutant.Conclusion:Successfullyestablishingsequencingproceduretodiagnosepointmutationsofthedystrophingene,whichisthepremiseformappingmutationsindystrophingeneofDuchenneVietnampatients.Keywords:DMD,Duchennemusculardystrophy,dystrophingene,pointmutation.*BộmônHóasinh,TrungTâmYSinhHọcPhânTử,ĐạihọcYDượcTP.HồChíMinhTácgiảliênlạc:TS.BS.NguyễnthịBăngSương,ĐT:0914007038Email:suongnguyenmd@gmail.com508ChuyênĐềSứcKhỏeSinhSảnvàBàMẹTrẻemYHọcTP.HồChíMinh*Tập18*PhụbảncủaSố1*2014ĐẶTVẤNĐỀLoạn dưỡng cơ Duchenne (DMD:Duchenne muscular dystrophy) là bệnh lý cơdo di truyền với tần suất bệnh vào khoảng1/3500 trẻ trai. Đây là bệnh di truyền lặn liênkết giới tính, gây nên bởi đột biến gendystrophin.GennàynằmtrênnhiễmsắcthểXở locus Xp21, gồm 79 exon với 7 promoterkhác nhau. Gen dystrophin sao mã ra mRNA14kbvàtổnghợpsảnphẩmproteintươngứnglà dystrophin. Đột biến gen làm ảnh hưởngđến quá trình tổng hợp protein dystrophin,cấu trúc protein thay đổi và mất chức năngbảo vệ tế bào cơ, do vậy tế bào cơ của bệnhnhân bị tổn thương(9). Triệu chứng điển hìnhcủabệnhDMDlàyếucơđốixứnggốcchi,teocơtiếntriểnvàbệnhnhânthườngtửvongdosuy hô hấp. Bên cạnh đó nồng độ enzymecreatine kinase tăng cao do tế bào cơ bị thoáihóa. Theo các nhà nghiên cứu, dạng đột biếnphổ biến nhất xảy ra trên gen dystrophin làđộtbiếnxóađoạngen,chiếmtỷlệ60‐65%.Độtbiến điểm đứng thứ hai về mức độ thườnggặp,chiếm20‐30%.Độtbiếnlặpđoạn,khoảng10‐15%(9,11). Hiện nay có nhiều phương phápgiúp chẩn đoán đột biến mất đoạn gendystrophin như kỹ thuật multiplex PCR(polymerase chain reaction), RT‐PCR (reversetranscriptase PCR), MLPA (multiplex ligationprobe amplification),...Trong đó, kỹ thuậtMLPA được đánh giá cao khi ứng dụng đểchẩnđoánđộtbiếnmấtđoạnvàlặ ...